湖北省药品监督检验研究院汪波获国家专利权
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龙图腾网获悉湖北省药品监督检验研究院申请的专利一种基于MLPA技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115181811B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-12发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210704034.3,技术领域涉及:C12Q1/6895;该发明授权一种基于MLPA技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法是由汪波;胡敏;徐玲;王文斌;李小芳;程华春;莫静设计研发完成,并于2022-06-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于MLPA技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基于多重连接探针扩增技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法,包括以下步骤:1提取样品基因组DNA;2以基因组DNA为模板,利用特异性引物扩增麦冬与山麦冬的叶绿体基因片段并纯化扩增产物;3将MLPA探针与纯化产物进行杂交;4利用DNA连接酶将杂交产物进行连接;5利用通用引物对连接产物进行qPCR扩增;6收集熔解曲线信号,观测Tm值。本发明能够在很短的时间内同时鉴别中药材麦冬和山麦冬,该方法具有特异性强,灵敏度高等优点,在中药材真伪鉴定领域有很好的应用前景。
本发明授权一种基于MLPA技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于多重连接探针扩增技术对中药材麦冬与山麦冬进行鉴别的方法,其特征在于包括以下步骤: 1提取样品基因组DNA; 2以提取的基因组DNA为模板,利用特异性引物扩增麦冬与山麦冬的叶绿体基因片段并纯化扩增产物,所述麦冬与山麦冬的叶绿体基因片段的核苷酸序列分别如SEQIDNO:8、9所示;用于扩增所述叶绿体基因片段的特异性引物序列如下;上游引物:如SEQIDNO:4所示的序列;下游引物:如SEQIDNO:5所示的序列; 3将MLPA探针与纯化产物进行杂交; 4利用DNA连接酶将步骤3的杂交产物进行连接; 5利用通用引物对步骤4的连接产物进行qPCR扩增,所述通用引物序列如下:PrimerF:如SEQIDNO:6所示的序列;PrimerR:如SEQIDNO:7所示的序列; 6收集熔解曲线信号,观测Tm值, 其中,所述MLPA探针共3条,由两条左探针和一条右探针组成,探针序列如下: 麦冬左探针:如SEQIDNO:1所示的序列; 山麦冬左探针:如SEQIDNO:2所示的序列; 共同右探针:如SEQIDNO:3所示的序列; 所述MLPA探针中,麦冬左探针、山麦冬左探针、共同右探针的体积比为0.6:1.0:1.6; 步骤6中,通过观测样品熔解曲线峰和Tm值进行鉴定,若样品出现单一熔解曲线峰并且Tm值为78.98℃±0.1℃,则为麦冬;若样品出现单一熔解曲线峰且Tm值为80.57℃±0.1℃,则为山麦冬;若样品出现双熔解曲线峰并且熔解峰Tm值为78.98℃±0.1℃和80.57℃±0.1℃,则为麦冬与山麦冬混合样品。
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