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龙图腾网获悉广东工业大学申请的专利一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115572698B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-01发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211335264.3，技术领域涉及：C12N1/20；该发明授权一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用是由李桂英;刘琴;蔡仪威;安太成设计研发完成，并于2022-10-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明属于微生物技术领域，公开了一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用，该方法是将处于3～20代的细胞转移孔板中，得到诱导细胞；将处于对数增长期的细菌经缓冲液洗涤，改性细胞培养液重悬，得到细菌悬液。将细菌悬液加入诱导细胞中，在恒温培养箱中孵育1～5h后，后加入含10～500mgL庆大霉素改性细胞培养液，经细胞处理3～10d后，加入细胞裂解液收集胞内的细菌再洗涤、离心、重悬，得到活的不可培养状态的细菌。本发明在宿主细胞存在条件下可以诱导细菌进入活的不可培养状态，不仅拓展了对活的不可培养状态细菌的认识，也为临床中的复发性、慢性感染疾病提供理论与技术支持。

本发明授权一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种在宿主细胞存在条件下诱导形成活的不可培养状态细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1.将细胞融合度为70~90%的细胞培养液吸弃，用缓冲液洗涤，胰蛋白酶消化，收集细胞，通过细胞计数确定细胞的浓度，再将所得细胞转移至不同规格的细胞培养皿中，后置于培养箱中培养，得到诱导细胞；所述细胞为人体细胞中的16HBE、Base-2B或HaCaT，所述细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或铜绿假单胞菌中的一种以上；所述细胞数量为104~107cellwell，细菌悬液浓度为104~108CFUmL； S2.将过夜培养的细菌收集，经缓冲液洗涤和离心，后加入改性细胞培养液重悬，使用酶标仪调节细菌的OD值等于细菌的浓度值，将已知浓度的细菌通过梯度稀释得到细菌悬液；所述改性细胞培养液为细胞基础培养液和FBS；细胞基础培养液的含量为30~99.95wt%，FBS在细胞基础培养液中的含量为0.05~50wt%；所述细胞基础培养液为DMEM，RPMI1640，MEM或F-12K； S3.在超净工作台内，将步骤S2中细菌悬液加入到诱导细胞中，经离心使细菌充分进入细胞内，随后转移至10~60℃，0.5~30vol%CO2的恒温培养箱中孵育1~5h； S4.培养皿中在超净工作台内，去除步骤S3细胞培养皿中的细菌悬液，并用缓冲液洗涤，加入含浓度为10~500mgL庆大霉素的细胞培养液，置于培养箱中孵育，再吸弃培养液，随后加入含浓度为10~500mgL庆大霉素的细胞培养液，以防止被感染死细胞释放的细菌再次感染，通过光学显微镜监测细胞情况，及时更换细胞培养液； S5.在细胞作用3~10天后收集宿主细胞内的细菌，首先移除细菌悬液，并用缓冲液洗涤，再加入0.1~10wt%的SDS细胞裂解液，室温孵育释放出胞内细菌，加入缓冲液洗涤，经离心，洗涤，缓冲液重悬，得到活的不可培养状态细菌；所述细胞培养液均为细胞基础培养液、FBS和青霉素-链霉素，细胞基础培养液的含量为30~99.9wt%，FBS在细胞基础培养液中的含量为0.05~50wt%，青霉素-链霉素在细胞基础培养液中的含量为0.05~5wt%，所述细胞基础培养液为DMEM、RPMI1640、MEM或F-12K。

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