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龙图腾网获悉山东大学;青岛易邦生物工程有限公司申请的专利一种伪狂犬病毒Bartha K61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统及其构建方法与应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118895283B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-21发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310496833.0，技术领域涉及：C12N15/38；该发明授权一种伪狂犬病毒Bartha K61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统及其构建方法与应用是由王海龙;谭龙;郭伟伟;袁恒星;何若婷;栾霁;符军;杜元钊;张友明设计研发完成，并于2023-05-05向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种伪狂犬病毒Bartha K61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统及其构建方法与应用在说明书摘要公布了：本发明涉及一种伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统及其构建方法与应用。该系统包括：含有伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的重组质粒BAC‑cm‑PRV‑EA、BAC‑cm‑PRV‑BC和BAC‑cm‑PRV‑FG，以及表达伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的宿主细胞。本发明伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株的反向遗传操作系统，通过ExoCET克隆与组装技术将BarthaK61基因组成功拆分为6段，再组装成3个重组质粒BAC‑cm‑PRV‑EA、BAC‑cm‑PRV‑BC和BAC‑cm‑PRV‑FG，这三个重组质粒经PacI线性化后可以共同转染到非洲绿猴肾细胞，拯救BarthaK61病毒，并且所拯救出的BarthaK61病毒感染效力与疫苗株相当。因此该反向遗传操作系统可以为创制猪病防治相关活载体疫苗提供优良载体，用于研制表达相关猪病抗原基因的BarthaK61重组基因工程载体疫苗。

本发明授权一种伪狂犬病毒Bartha K61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统及其构建方法与应用在权利要求书中公布了：1.一种伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株基因组分段克隆和拯救的反向遗传操作系统，其特征在于，该系统包括：含有伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的重组质粒BAC-cm-PRV-EA、BAC-cm-PRV-BC和BAC-cm-PRV-FG，以及表达伪狂犬病毒BarthaK61疫苗株全基因组的宿主细胞； 所述重组质粒BAC-cm-PRV-EA、BAC-cm-PRV-BC和BAC-cm-PRV-FG的构建方法如下： 1将BarthaK61基因组切割成六段，分别为A段26kb、B段12kb、C段30kb、F段32kb、G段19kb和E段18kb； 其中，所述切割具体为：先采用BglⅡ酶将BarthaK61基因组切割成A段26kb、B段12kb、C段30kb、D段51kb和E段18kb，再采用SwaI酶将D段切割成F段32kb和G段19kb； 2将基因组B段和E段直接克隆到p15A-amp载体上，得到重组质粒p15A-amp-PRV-B和p15A-amp-PRV-E； 3以BarthaK61基因组为模板，通过PCR扩增长度小于等于3kb的小片段，然后将得到的小片段与p15A-amp载体进行ExoCET多片段组装，得到分别含有基因组A段、C段、F段和G段的重组质粒p15A-amp-PRV-A、p15A-amp-PRV-C、p15A-amp-PRV-F和p15A-amp-PRV-G； 4将重组质粒p15A-amp-PRV-A、p15A-amp-PRV-B、p15A-amp-PRV-C、p15A-amp-PRV-F和p15A-amp-PRV-G和p15A-amp-PRV-E酶切后，得到PRV-A片段、PRV-B片段、PRV-C片段、PRV-F片段、PRV-G片段和PRV-E片段，所述PRV-A片段与PRV-E片段之间、PRV-B片段与PRV-C片段之间、PRV-F片段与PRV-G片段之间均含有50bp的同源臂；然后通过Gibson体外重组按照EA、BC和FG的组合分别与含有相应50bp同源臂的BAC-cm载体进行体外重组，得到重组质粒BAC-cm-PRV-EA、BAC-cm-PRV-BC和BAC-cm-PRV-FG。

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