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龙图腾网获悉江苏省农业科学院申请的专利一种荷斯坦奶牛精子活力miRNA分子标记选择方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115011698B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-14发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111286763.3，技术领域涉及：C12Q1/6888；该发明授权一种荷斯坦奶牛精子活力miRNA分子标记选择方法是由丁强;王慧利;夏淑雯;陈坤琳;赵芳;曹少先;钱勇;仲跻峰设计研发完成，并于2021-11-02向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种荷斯坦奶牛精子活力miRNA分子标记选择方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种荷斯坦奶牛精子活力miRNA分子标记选择方法，包括1针对荷斯坦奶牛miRNA前体区域设计特异性引物，对待检奶牛基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；2利用BspEI限制性内切酶对PCR产物进行酶切，电泳分型，出现3种基因型：TT型、TC型、CC型；3CC型在精子活力显著高于TT型，CC型精子畸形率显著低于TT型，因此选择CC型、TC型留种，提高C基因型频率。该方法可提高奶牛精液品质选择的准确性，用于高品质奶牛的选育工作，为加强中国荷斯坦奶牛优良种质提供选育工具。

本发明授权一种荷斯坦奶牛精子活力miRNA分子标记选择方法在权利要求书中公布了：1.一种采用PCR-RFLP方法检测miR-6531前体区73TC位点的多态性在荷斯坦奶牛精液品质育种选择中的应用，其特征在于：所述方法包括以下步骤， 1选取荷斯坦奶牛，人工采精1.5ml，测定精液品质数据，并采用常规酚、氯仿法提取精子DNA，电泳及测定OD260280检测DNA质量； 2根据GenBank序列NC_037350.1，利用PrimerPremier5软件设计一对特异性引物，PCR扩增荷斯坦奶牛miR-6531前体区域序列，PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色检测扩增结果； 所述特异性引物的序列为， P1：GCAGAGCGTGTCTTAGTTA； P2：CCGTCAGGTACTCCAACA； 3荷斯坦奶牛miR-6531前体区域73位点存在一个T→C突变，产生一个BspEI酶切位点，利用BspEI限制性内切酶，对扩增产物进行酶切，采用2%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，溴化乙锭染色，凝胶成像系统拍照，将获得427bp片段的定义为TT型，获得427bp、250bp、177bp三个片段的定义为TC型，获得250bp、177bp两个片段的定义为CC型； 所述miR-6531前体区73TC多态位点是根据牛SNP公共数据库http:genome.ucsc.educgi-binhgTables；Bos_taurus_UMD3.1.1;SNP14并利用miRNAQTLsnp软件筛选得到； 所述BspEI酶切位点为TCTGGA→TCCGGA； 采用单因素方差分析比较不同基因型间各精液品质指标的差异，结果表明CC型奶牛个体的精液品质显著高于TT型，选择CC型和TC型个体留种； 所述精液品质为鲜精活力、精子密度和精子畸形率，CC型荷斯坦奶牛鲜精活力、精子密度分别高于TT型，而畸形率则低于TT型。

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