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龙图腾网获悉江苏姜曲海猪种业有限公司;江苏农牧科技职业学院申请的专利一种猪YBX3基因敲除细胞系的构建方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN118910163B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202411020053.X，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种猪YBX3基因敲除细胞系的构建方法及其应用是由吴嘉韵;张伟;郭敏;刘凯瑞;仲震设计研发完成，并于2024-07-29向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种猪YBX3基因敲除细胞系的构建方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明提供了一种猪YBX3基因敲除细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、设计sgRNA向导序列，分别为sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3；S2、在5’端添加额外碱基CACC；S3、阳性敲除质粒混合电转入IPEC‑J2细胞系并进行药筛，提取YBX3敲除细胞DNA，使用T7EndonucleaseI酶将PCR产物酶切，同时进行PCR的扩增测序，验证sgRNA效率；S4、选择转染高效率sgRNA的IPEC‑J2进行有限稀释法筛选；S5、RT‑qPCR检测PEDVM基因的表达差异。本发明成功建立猪YBX3基因敲除的IPEC‑J2细胞系，CRISPRCas9敲除技术比起干扰、基因沉默等技术手段更有效果，能够有助于研究YBX3在猪抗病育种中的功能。

本发明授权一种猪YBX3基因敲除细胞系的构建方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种猪YBX3基因敲除细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、通过在线软件网址设计sgRNA2向导序列，所述sgRNA2的序列为： sgRNA2：GAGATTGGAGAAATGAAGGA； S2、针对所述sgRNA2的引物合成需在5’端添加额外碱基CACC，若sgRNA5’端无碱基G，则额外添加碱基G，反向互补序列添加额外碱基AAAC，所述sgRNA2的引物序列为： YBX3-2F：CACCGAGATTGGAGAAATGAAGGA； YBX3-2R：AAACTCCTTCATTTCTCCAATCTC； 之后退火后形成dsDNA；退火后dsDNA进行酶切，并连接至线性化PGK1.2载体，得到连接产物，后续进行PCR测序挑选阳性克隆并扩大培养，提取质粒得到阳性敲除质粒； S3、阳性敲除质粒混合电转入IPEC-J2细胞系并进行药筛，提取YBX3敲除细胞DNA，使用T7EndonucleaseI酶将PCR产物酶切，同时进行PCR的扩增测序，验证sgRNA效率； S4、选择转染高效率sgRNA的IPEC-J2进行有限稀释法筛选，挑选单克隆细胞，扩大培养后经PCR测序和Westernblot验证成功筛选得到YBX3基因敲除细胞系； S5、YBX3敲除细胞系和对照组细胞提取RNA，反转录后使用RT-qPCR检测PEDVM基因的表达差异。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人江苏姜曲海猪种业有限公司;江苏农牧科技职业学院，其通讯地址为：225300 江苏省泰州市农业开发区苏红路68号；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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