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龙图腾网获悉复旦大学申请的专利一种酶催化级联合成宝丹酮的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115873813B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211544390.X，技术领域涉及：C12N9/02；该发明授权一种酶催化级联合成宝丹酮的方法是由陈芬儿;张娅娇;黄则度;韦建海;程荡;孟歌设计研发完成，并于2022-12-04向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种酶催化级联合成宝丹酮的方法在说明书摘要公布了：本发明属于生物制药和生物化工技术领域，具体为酶催化级联合成宝丹酮的方法。本发明以廉价易得的雄甾‑4‑烯‑3,17‑二酮为底物，通过3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶和17β‑羟基脱氢酶催化的级联反应合成宝丹酮。本发明涉及3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶突变体及其编码基因，突变体的获得，含有3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶基因和17β‑羟基脱氢酶基因的重组表达载体及重组表达转化体，3‑甾酮‑Δ1‑脱氢酶及其突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.1，SEQIDNO.2，SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示，17β‑羟基脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示。本发明简化了甾体药物的合成步骤，显著提高催化选择性和产率，并且底物浓度高、反应条件温和，成本低廉，绿色环保。

本发明授权一种酶催化级联合成宝丹酮的方法在权利要求书中公布了：1.一种酶催化级联合成宝丹酮的方法，其特征在于，具体步骤如下：将雄甾-4-烯-3,17-二酮在3-甾酮-Δ1-脱氢酶ReKstD野生型酶的突变体，以及17β-羟基脱氢酶的作用下，生成宝丹酮；具体操作为：将共表达3-甾酮-Δ1-脱氢酶ReKstD野生型酶的突变体，以及17β-羟基脱氢酶的遗传工程菌的湿菌体用缓冲液重悬，加入底物雄甾-4-烯-3,17-二酮、异丙醇IPA、N,N-二甲基甲酰胺DMF、吩嗪硫酸甲酯PMS，20～37℃条件下反应完全，加入乙酸乙酯萃取反应液后得到乙酸乙酯萃取液，经无水硫酸钠脱水、抽滤、减压浓缩后得到粗产品；粗产品通过柱层析进行纯化得到产物宝丹酮； 其中； 所述3-甾酮-Δ1-脱氢酶ReKstD野生型酶的突变体为ReKstD-I53L、ReKstD-I352T或ReKstD-I53LI352T；所述野生型酶ReKstD的氨基酸序列为SEQIDNO:1所示，所述突变体ReKstD-I53L的氨基酸序列为SEQIDNO:2所示，所述突变体ReKstD-I352T的氨基酸序列为SEQIDNO:3所示,所述突变体ReKstD-I53LI352T的氨基酸序列为SEQIDNO:4所示； 所述17β-羟基脱氢酶的氨基酸序列为SEQIDNO:5所示； 在起始反应体系中，底物的质量百分浓度为0.5%-5%wv，所述遗传工程菌的用量按湿菌体计算为底物质量的300%-1000%，IPA的用量为1%-10%vv，DMF的用量为5%-25%vv，PMS的用量为1-5mM，反应液的pH为6-9。

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