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龙图腾网获悉中国农业科学院兰州兽医研究所申请的专利猪脑心肌炎病毒样颗粒及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116121303B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211248852.3，技术领域涉及：C12N15/866；该发明授权猪脑心肌炎病毒样颗粒及其制备方法和应用是由郭慧琛;白满元;孙世琪;景伟;张韵;董虎;穆素雨;吴金恩;尹双辉;丁耀忠设计研发完成，并于2022-10-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本猪脑心肌炎病毒样颗粒及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了猪脑心肌炎病毒样颗粒及其制备方法和应用。本发明将EMCV的P1、3CD基因扩增后，然后分别连接到pFastBacDual载体的PpH和Pp10启动子下，构建了重组转移载体pFBD‑P1‑3CD，将pFBD‑P1‑3CD转化至E.coliDH10Bac感受态细胞，通过筛选蓝白斑获得了重组杆粒rBacmid‑P1‑3CD。将rBacmid‑P1‑3CD转染至sf9昆虫细胞，最后通过蔗糖密度梯度纯化获得病毒样颗粒EMCV‑VLPs。实验证明获得的EMCV‑VLPs具有良好的免疫原性，可以诱导机体产生良好的免疫反应，能够作为战略储备疫苗用于EMCV的防控。

本发明授权猪脑心肌炎病毒样颗粒及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种制备猪脑心肌炎病毒样颗粒的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤： 1RNA的提取及反转录 提取EMCV病毒液的总RNA，然后通过反转录系统得到cDNA，测浓度后存于-20℃冰箱备用； 2P1、3CD片段的扩增 根据NCBI中GenBack公布的EMCV-P1和EMCV-3CD的基因序列，利用引物设计软件设计扩增其全长序列的特异性引物，以BamHI和HindIII两个限制性酶的识别位点分别设计扩增P1的上下游引物P1-FPP1-RP，以NheI和KpnI两个限制性酶的识别位点分别设计扩增3CD的上下游引物3CD-FP3CD-RP，以EMCV的cDNA为模板，分别扩增P1和3CD的目的片段； P1-FP：5'-GGATCCATGTCCTCAGACAAGAATAACT-3' P1-RP：5'-AAGCTTTTATAGCATCAAGACTCCAGCT-3' 3CD-FP：5'-GCTAGCATGCCGAACCCTGTGATGGACTT-3' 3CD-RP：5'-GGTACCTTAGAACAGACTCCTCCATCTGT-3' 编码脑心肌炎病毒P1蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，编码脑心肌炎病毒3CD蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示； 3pFBD-P1的构建 将胶回收纯化后的P1目的基因与pFastBacDual载体分别用BamHI和HindIII进行双酶切，将酶切后的P1目的片段与pFastBacDual载体连接，得到重组质粒pFBD-P1； 4pFBD-P1-3CD的构建 将胶回收纯化后的3CD目的基因与重组质粒pFBD-P1分别用NheI和KpnI进行双酶切，酶切后的3CD目的片段与pFBD-P1载体连接，得到重组转移质粒pFBD-P1-3CD； 5重组转移质粒pFBD-P1-3CD转化至E.coliDH10Bac感受态细胞 将构建好的pFBD-P1-3CD转化至E.coliDH10Bac感受态细胞，经蓝白斑筛选，获得阳性菌落，菌落经过培养，从中提取获得重组杆粒rBacmid-P1-3CD； 6重组杆状病毒的表达 将重组杆粒rBacmid-P1-3CD转染至sf9昆虫细胞，获得P1代毒株，用P1代毒株继续感染sf9昆虫细胞，以获得滴度较高的P2代毒株，同样用P2代病毒液感染sf9昆虫细胞获得P3代毒株； 7EMCV-VLPs的纯化及鉴定 用P3代病毒液感染sf9昆虫细胞，收获细胞培养液，经过反复冻融、离心、浓缩、乳化、蔗糖密度梯度纯化后获得纯化的猪脑心肌炎病毒样颗粒。

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