浙江大学杭州国际科创中心潘荣辉获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江大学杭州国际科创中心申请的专利一种基因序列检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115948511B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211429022.0,技术领域涉及:C12Q1/6825;该发明授权一种基因序列检测方法是由潘荣辉;张凯;朱霞;沈星星;胡晋;关亚静设计研发完成,并于2022-11-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基因序列检测方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种基因序列检测方法,用电化学发光结合CRISPRCas12a构成的传感器通过引入靶标来改变ECL信号输出,以引起电极表面上ECL发光材料的能量转移的变化。由于ECL信号是在没有外部光源刺激的情况下产生的,因此在具有高灵敏度的同时减少了背景信号的干扰。该检测系统具有良好的稳定性和可重复性,这对于在目前资源相对匮乏的地区有效大规模筛查转基因作物至关重要,我们期望该方法可能为转基因作物的检测提供潜在的平台。
本发明授权一种基因序列检测方法在权利要求书中公布了:1.一种基因序列检测方法,使用ECL电化学生物传感器进行检测,所述ECL电化学生物传感器包括金电极,金电极经激活后偶联DT探针,所述DT探针为由T1、T2、T3、T4四条单链DNA退火组装形成的DNA四面体结构, 其特征在于,所述基因序列检测方法包括以下步骤: 1将T1、DNA1和DNA2三条DNA链制备成三链DNA复合物,将待检测对象、燃料链F和所述三链DNA复合物混合制得熵驱动链置换反应溶液; 2将所述ECL电化学生物传感器与步骤1中熵驱动链置换反应溶液孵育,孵育完成后,将ECL电化学生物传感器与修饰有信号分子的DNA溶液进行孵育,获得孵育后的ECL电化学生物传感器; 3使用crRNA和S1、S2激活CRISPRCas12a反式切割活性,制备切割反应液;crRNA的序列为:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCCACGACUGAGCCUCUUACUA;S1的序列为:CGACTATGTTTACCACGACTGAGCCTCTTACTA;S2的序列为:TAGTAAGAGGCTCAGTCGTGGTAAACATAGT; 4将步骤2中孵育后的ECL电化学生物传感器浸入步骤3切割反应液中进行单链裂解,然后检测ECL信号强度,ECL信号强度越强,待检测对象中靶标序列浓度越高; T1序列包括依次排列的以下部分:用于和靶标序列结合的T1-1、用于和部分DNA2结合的T1-2、用于和部分DNA1结合的T1-3,以及用于构建DNA四面体支架的T1-4, 其中,T1-1和T1-2具有部分序列的重叠,以使靶标序列与T1-1结合时,DNA2与T1-2的结合力变弱而掉落; T2序列、T3序列用于构建DNA四面体支架; T4序列包括依次排列的以下部分:用于构建DNA四面体支架的T4-1,用于与DNA1结合的T4-2,用于与修饰有信号分子的DNA结合的T4-3; 其中,所述DNA四面体结构中的DNA四面体支架由T1序列中的T1-4、T2序列、T3序列以及T4序列中的T4-1组装而成,T1序列的T1-1、T1-2和T1-3从DNA四面体支架中远离金电极的顶点伸出,T4序列的T4-2和T4-3从靠近金电极的其中一个顶点上伸出作为捕获DNA; T2序列和T3序列的一端、T4序列的T4-1一端各修饰有用于与金电极偶联的偶联基团; 在有靶标的情况下,靶标与T1-1结合,释放DNA2,并暴露出T1-5与燃料链F结合,将DNA1和靶标置换下来,其中,T1-5的序列为T1-2序列和T1-3序列;DNA1和信号分子与捕获DNA杂交形成双链,无法被CRISPR-Cas12a切割; 当没有靶标存在时,捕获DNA无法形成完整的双链,CRISPR-Cas12a将单链切割,从而导致信号分子无法聚集在电极上,失去ECL信号。
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