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江南大学高晓冬获国家专利权

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龙图腾网获悉江南大学申请的专利一种人源岩藻糖转移酶8的原核表达方法及其产品获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN110317799B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-04-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:201910650553.4,技术领域涉及:C12N9/10;该发明授权一种人源岩藻糖转移酶8的原核表达方法及其产品是由高晓冬;陆天天;王宁设计研发完成,并于2019-07-18向国家知识产权局提交的专利申请。

一种人源岩藻糖转移酶8的原核表达方法及其产品在说明书摘要公布了:本发明公开了一种岩藻糖转移酶8的原核表达方法及其产品,其中一种岩藻糖转移酶8的原核表达方法,其包括,构建截短型岩藻糖转移酶8,得Fut8ΔTM;构建重组表达质粒;将所述重组表达质粒转化表达宿主菌,表达、纯化;其中,所述Fut8ΔTM的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示;一种原核表达的岩藻糖转移酶8,其包括岩藻糖转移酶8核心区氨基酸序列,所述藻糖转移酶8核心区氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。本发明利用大肠杆菌成功表达人源截短型Fut8Fut8ΔTM,可以在短时间内大量制备该蛋白并且保持其较高的生物活性,有表达效率高、杂蛋白少、易于纯化、廉价方便等特点。

本发明授权一种人源岩藻糖转移酶8的原核表达方法及其产品在权利要求书中公布了:1.一种岩藻糖转移酶8的原核表达方法,其特征在于:包括,构建截短型岩藻糖转移酶8,得Fut8ΔTM;构建重组表达质粒;将所述重组表达质粒转化表达宿主菌,表达、纯化;其中,所述Fut8ΔTM的氨基酸序列为序列SEQIDNO:2的68-545位;所述表达质粒为pET28a,所述重组表达质粒为pET28a-Fut8ΔTM,所述表达宿主菌为ROSETTA; 所述表达,其为先在37℃℃、200rmin条件下振荡培养所述表达宿主菌,使OD600达到0.6~0.8,降温至16℃继续培养,加入IPTG,在16℃、200rmin诱导培养;所述纯化,其为将所述表达宿主菌破碎,重悬于缓冲液A中,加入Ni-NTAAgarose于4℃旋转孵育45min,低速离心,分别用所述缓冲液A和含第一浓度咪唑的所述缓冲液A冲洗柱子,用含第二浓度咪唑的所述缓冲液A和含第三浓度咪唑的所述缓冲液A洗脱蛋白;其中,所述缓冲液A为包括三羟甲基氨基甲烷、HCl、NaCl的混合溶液;所述第一浓度小于等于所述第二浓度,所述第二浓度小于等于所述第三浓度; 其中,所述表达,其为使所述表达宿主菌在培养基中培养、诱导;所述纯化,其为超声破碎所述表达宿主菌后通过镍亲和层析进行纯化; 所述纯化,其为将所述表达宿主菌破碎,重悬于缓冲液A中,加入Ni-NTAAgarose于4℃旋转孵育45min,低速离心,分别用所述缓冲液A和含10~30mM咪唑的所述缓冲液A冲洗柱子,用含45~85mM咪唑的所述缓冲液A和含150~350mM咪唑的所述缓冲液A洗脱蛋白;其中,所述缓冲液A为pH8.0的TrisHCl和NaCl混合溶液。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人江南大学,其通讯地址为:214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

以上内容由龙图腾AI智能生成。

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