光明乳业股份有限公司张红发获国家专利权
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龙图腾网获悉光明乳业股份有限公司申请的专利一种发酵乳的杂菌检测方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN112176048B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-31发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202011204682.X,技术领域涉及:C12Q1/6869;该发明授权一种发酵乳的杂菌检测方法是由张红发;刘振民;游春苹设计研发完成,并于2020-11-02向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种发酵乳的杂菌检测方法在说明书摘要公布了:本发明涉及乳制品领域,特别是涉及一种发酵乳的杂菌检测方法。本发明提供一种发酵乳的杂菌检测方法,包括:1提供待测样品的菌体基因组DNA样品;2通过CRISPR‑Cas9体系特异性地切割步骤1所提供的菌体基因组DNA样品中的发酵菌基因组DNA,以提供经受切割后的基因组DNA样品;3通过步骤2所提供的经受切割后的基因组DNA样品,构建目标杂菌的靶标序列的测序文库;4根据步骤3所提供的测序文库,获取待测样品中所含的目标杂菌。本发明所提供的杂菌检测方法,可以高效地排除发酵菌的干扰,快速、灵敏地分析发酵乳中的杂菌污染,具有操作简便、精准删除、灵敏度高、成本低等优点。
本发明授权一种发酵乳的杂菌检测方法在权利要求书中公布了:1.一种发酵乳的杂菌检测方法,包括: 1提供待测样品的菌体基因组DNA样品; 2通过CRISPR-Cas9体系特异性地切割步骤1所提供的菌体基因组DNA样品中的发酵菌基因组DNA,以提供经受切割后的基因组DNA样品;所述CRISPR-Cas9体系包括sgRNA和Cas9酶,所述sgRNA针对发酵菌基因组DNA上的16SrRNA序列;所述sgRNA包括第一sgRNA和第二sgRNA,所述第一sgRNA和第二sgRNA的多核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2; 3通过步骤2所提供的经受切割后的基因组DNA样品,构建目标杂菌的靶标序列的测序文库; 4根据步骤3所提供的测序文库,获取待测样品中所含的目标杂菌; 所述测序文库为高通量测序文库,构建目标杂菌的靶标序列的高通量测序文库的方法具体包括:以特异性针对目标杂菌的靶标序列的通用引物扩增步骤2所提供的经受切割后的基因组DNA样品,将扩增产物添加接头和标签,以提供目标杂菌的靶标序列的高通量测序文库; 所述的目标杂菌的靶标序列是目标杂菌的16SrRNA序列;所述特异性针对目标杂菌的靶标序列的高通量测序引物包括第一扩增引物和第二扩增引物,所述第一扩增引物和第二扩增引物的多核苷酸序列分别包括如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的序列;所述特异性针对目标杂菌的靶标序列的通用引物包括第三扩增引物和第四扩增引物,所述第三扩增引物和第四扩增引物的多核苷酸序列分别包括如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的序列; 所述发酵菌选自嗜热链球菌,所述目标杂菌选自植物乳杆菌。
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