中国科学院水生生物研究所张茹获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院水生生物研究所申请的专利一种胭脂鱼个体遗传复活方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121271785B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511811687.1,技术领域涉及:C12N5/076;该发明授权一种胭脂鱼个体遗传复活方法及其应用是由张茹;孙永华;杨冉;曾江设计研发完成,并于2025-12-04向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种胭脂鱼个体遗传复活方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明提供一种胭脂鱼个体遗传复活的方法,包括以下步骤:S1、取胭脂鱼性腺组织,清洗,剪碎,加含双抗的L‑15培养基和DPBS缓冲液离心得性腺组织;S2、将性腺组织水浴,得复苏的性腺组织;S3、将复苏的性腺组织进行消化,过滤,离心纯化,得生殖干细胞;S4、注射morpholino获取剔除原始生殖细胞的稀有鮈鲫;S5、将生殖干细胞移植到稀有鮈鲫幼鱼体内,培养,即得胭脂鱼配子。S6、将产生的胭脂鱼配子进行受精,即得胭脂鱼个体。本发明利用冻存性腺+借腹生殖技术,成功获取了胭脂鱼的精子,为珍稀濒危鱼类的个体遗传复活提供一个可行途径。
本发明授权一种胭脂鱼个体遗传复活方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种胭脂鱼个体遗传复活的方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、取胭脂鱼的性腺,清洗,剪碎,加入含双抗的L-15培养基和DPBS缓冲液;其中,当性腺为精巢时需要重复离心并去除上层成熟精子直至上层液澄清无精子,得到的沉淀即为精巢组织;当性腺为卵巢时无需去除卵子,即得卵巢组织; S2、将S1获取的性腺组织进行水浴,逐滴加入含10%FBS的含双抗的L-15培养基,边滴加边混匀,离心,去上清,清洗,得复苏的性腺组织; S3、向S2复苏的性腺组织中加入含胰蛋白酶和胶原酶的DMEM培养基进行消化,过滤,滤液采用Percoll密度梯度离心法纯化,得生殖干细胞; S4、针对稀有鮈鲫的deadend基因设计morpholino,并进行注射,获取剔除原始生殖细胞的稀有鮈鲫,并作为受体鱼; S5、将S3获取的生殖干细胞移植到S4的受体鱼幼鱼体内,培养,即得胭脂鱼精子; S6、将S5获取的胭脂鱼精子与胭脂鱼卵子进行受精,培养,即得胭脂鱼个体; 步骤S1中胭脂鱼的性腺的冻存性腺; 步骤S1中清洗利用含双抗的L-15培养基进行清洗,双抗为氨苄霉素、链霉素; 步骤S1中含双抗的L-15培养基和DPBS缓冲液用量比例为1:3; 每次离心条件:转速160~180rpm,时间1min; 步骤S2中所述水浴条件:35℃,时间2~3min; 性腺组织与含10%FBS的含双抗的L-15培养基的体积比1:10; 离心条件:160~180rpm,时间1.5~2.5min; 所述清洗利用DMEM培养基进行清洗; 步骤S3中每毫升DMEM培养基中胰蛋白酶含量为0.25%、胶原酶活性为0.26U; 消化条件:35℃水浴消化50~80min; 过滤使用孔径为40µm的筛子; 消化过程中还包括每隔15min用移液枪吹打数次以充分分散细胞; 步骤S4中所述morpholino序列为:5’-CTTCATAAGCGGATAACGACATGGA-3’。
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