浙江大学杭州国际科创中心鲍泽华获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江大学杭州国际科创中心申请的专利一种适用于酵母先导编辑的双质粒系统及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115948449B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211148322.1,技术领域涉及:C12N15/81;该发明授权一种适用于酵母先导编辑的双质粒系统及应用是由鲍泽华;史肖肖;谢炜熠;邓磊;蔡震坤设计研发完成,并于2022-09-20向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种适用于酵母先导编辑的双质粒系统及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种适用于酵母先导编辑的双质粒系统及应用,涉及微生物基因编辑及改造。所述双质粒系统,包含第一质粒与第二质粒,所述第一质粒含有用于编码epegRNA的序列,所述epegRNA为在pegRNA的3’末端引入一段基序的RNA分子,所述基序的序列如SEQIDNO.12所示;所述第二质粒含有用于编码核酸切口酶nCas9与逆转录酶M‑MLVRT融合所形成的融合蛋白的序列。本发明首次在酵母中对先导编辑系统的编辑效能进行检测,同时利用双质粒表达系统,分开表达epegRNA和nCas‑RT蛋白,提升酵母中先导编辑系统的编辑效率。
本发明授权一种适用于酵母先导编辑的双质粒系统及应用在权利要求书中公布了:1.一种双质粒系统在酵母基因编辑中的应用,所述酵母为酿酒酵母BY4741; 所述双质粒系统包含第一质粒与第二质粒,所述第一质粒含有用于编码epegRNA的序列, 所述epegRNA为在pegRNA的3’末端引入一段基序的RNA分子,所述基序的序列如SEQIDNO.12所示; 所述第二质粒含有用于编码核酸切口酶nCas9与逆转录酶M-MLVRT融合所形成的融合蛋白的序列,所述逆转录酶M-MLVRT包含五个位点的突变,分别为D200N、L603W、T330P、T306K和W313F; 第一质粒还包括用于编码PE3nicking-sgRNA的序列,通过Pre-tRNA序列与用于编码epegRNA的序列连接,所述用于编码PE3nicking-sgRNA的序列如SEQIDNO.14所示,所述Pre-tRNA序列如SEQIDNO.13所示; 第一质粒使用的骨架为表达载体pCRCT,第一质粒的序列如SEQIDNO.2所示; 第二质粒使用的骨架为表达载体p415,第二质粒的序列如SEQIDNO.5所示。
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