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龙图腾网获悉北京民海生物科技有限公司申请的专利检测重组CVA10疫苗外源基因拷贝数的标准质粒及其制法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114540540B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-27发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202011345683.6，技术领域涉及：C12Q1/70；该发明授权检测重组CVA10疫苗外源基因拷贝数的标准质粒及其制法和应用是由徐颖之;张改梅;李国顺;赵丽丽;谢学超;肖霞;肖海峰;顾美荣;刘建凯设计研发完成，并于2020-11-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本检测重组CVA10疫苗外源基因拷贝数的标准质粒及其制法和应用在说明书摘要公布了：本发明提供一种用于检测重组CVA10疫苗外源基因拷贝数的标准质粒及其制法和应用。本发明的标准质粒由内源基因MOX片段SEQIDNo.1、外源基因P1片段SEQIDNo.2和外源基因3CD片段SEQIDNo.3串联于克隆载体中。本发明通过构建标准质粒，采用Taqman探针‑荧光定量PCR法，简便快速、绝对定量、准确地对插入外源基因拷贝数进行分析，从而有效缩短了重组CVA10疫苗外源基因拷贝数测定的检测时间，便于多次重复操作，对基于汉逊酵母平台构建的重组CVA10疫苗外源基因拷贝数测定以及重组CVA10疫苗外源基因遗传稳定性验证具有广阔的应用前景。

本发明授权检测重组CVA10疫苗外源基因拷贝数的标准质粒及其制法和应用在权利要求书中公布了：1.一种用于检测重组CVA10疫苗外源基因拷贝数的标准质粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： ①、设计引物对，以汉逊酵母基因组为模板进行PCR扩增制备出如SEQIDNo.1所示的内源基因MOX片段；以重组CVA10疫苗基因组为模板进行PCR扩增制备出如SEQIDNo.2所示的外源基因P1片段和如SEQIDNo.3所示的外源基因3CD片段，再以扩增出的内源基因MOX片段、外源基因P1片段和外源基因3CD片段为模板，扩增出依次串联的基因片段CVA10-MOX-P1-3CD； ②、对pGEX6P1克隆载体和步骤①扩增得到的基因片段CVA10-MOX-P1-3CD进行双酶切，分别得到载体片段和目的片段； ③、将步骤②制得的载体片段和目的片段进行连接，得到重组质粒； ④、将步骤③得到的重组质粒转化至感受态细胞内，再将该感受态细胞涂布于对应的培养基中，于37℃恒温培养箱内培养，得到含有重组质粒的单克隆菌株； ⑤、采用PCR、双酶切及测序手段对步骤④得到的单克隆菌株加以鉴定； ⑥、经步骤⑤鉴定通过的单克隆菌株进行扩增，随后用质粒提取试剂盒对该单克隆菌株中的重组质粒加以提纯，得到标准质粒。

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