苏州大学李佳斌获国家专利权
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龙图腾网获悉苏州大学申请的专利泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120796443B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511292945.X,技术领域涉及:C12Q1/6818;该发明授权泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针及其制备方法是由李佳斌;张娜;李元鹏;许国强设计研发完成,并于2025-09-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针及其制备方法在说明书摘要公布了:本发明涉及一种泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针及其制备方法,属于蛋白质合成技术领域。本发明整合多肽固相合成和片段连接技术构建泛素修饰组蛋白,并分别在泛素和DNA上标记能形成荧光共振能量转移的荧光分子对,之后将泛素修饰组蛋白与另外三种组蛋白组装成八聚体,再与荧光标记DNA通过梯度透析形成完整的核小体探针。利用该方法制备得到的探针可被组蛋白去泛素化酶特异性水解,具有接近生理状态的底物特征,通过荧光共振信号变化实现组蛋白去泛素化酶活性的检测及抑制剂高通量筛选,该制备方法具有普适性高、分子结构精准和可大量制备的优点。
本发明授权泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针及其制备方法在权利要求书中公布了:1.一种泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 步骤S1、对第一组蛋白进行泛素化修饰,得到泛素修饰的组蛋白; 所述泛素的氨基端融合有甘氨酸-半胱氨酸二肽序列,所述半胱氨酸的巯基以乙酰氨甲基Acm保护; 步骤S2、使用供体荧光分子标记所述泛素修饰的组蛋白,使用受体荧光分子标记DNA,得到荧光标记的泛素修饰组蛋白和荧光标记的DNA;或 使用受体荧光分子标记所述泛素修饰的组蛋白,使用供体荧光分子标记DNA,得到荧光标记的泛素修饰组蛋白和荧光标记的DNA; 所述泛素与荧光分子通过巯基-马来酰亚胺加成反应进行连接,连接前需要脱除泛素的氨基端半胱氨酸的乙酰氨甲基Acm保护基; 步骤S3、将泛素氨基端被荧光分子标记的的组蛋白与第二组蛋白、第三组蛋白和第四组蛋白混合组装得到泛素氨基端被荧光分子标记的组蛋白八聚体; 步骤S4、将所述泛素氨基端被荧光分子标记的组蛋白八聚体与荧光分子标记的DNA混合,得到所述泛素修饰核小体荧光共振能量转移探针;步骤S1中,对第一组蛋白进行泛素化修饰包括以下步骤: 步骤S11、分别制备第一泛素截短体和第二泛素截短体,连接获得泛素酰肼; 步骤S12、分别对第一组蛋白的氨基端和羧基端进行截短,通过重组表达或固相合成得到组蛋白氨基端截短体和组蛋白羧基端截短体,将所述泛素酰肼与组蛋白羧基端截短体连接后获得泛素修饰的组蛋白短肽,所述泛素酰肼与组蛋白羧基端截短体通过辅基介导的多肽酰肼连接,所述组蛋白羧基端截短体的半胱氨酸以噻唑烷Thz保护; 步骤S13、将所述泛素修饰的组蛋白短肽与所述组蛋白氨基端截短体连接后获得所述泛素修饰的组蛋白,所述泛素修饰的组蛋白短肽在连接前需脱除噻唑烷Thz保护基。
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