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龙图腾网获悉河南中烟工业有限责任公司申请的专利一种克雷伯氏菌胞外酶Eyj-1在再造烟叶浓缩液中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116515776B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-13发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310238698.X，技术领域涉及：C12N9/00；该发明授权一种克雷伯氏菌胞外酶Eyj-1在再造烟叶浓缩液中的应用是由冯颖杰;杨宗灿;杨金初;张婷婷;郑峰洋;罗灿选;刘文召;徐永明;张智轩;李卓设计研发完成，并于2023-03-14向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种克雷伯氏菌胞外酶Eyj-1在再造烟叶浓缩液中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种克雷伯氏菌胞外酶Eyj‑1在再造烟叶浓缩液中的应用，该克雷伯氏菌胞外酶Eyj‑1通过以下方法制备：1种子液制备：将克雷伯氏菌接种培养，得种子液；2微生物产酶发酵：种子液与再造烟叶浓缩液混合，培养得种子；加入烟末，继续震荡得发酵液；3胞外酶的制备：将发酵液离心去沉淀，得胞外酶粗酶，胞外酶粗酶与无水硫酸铵混合，去沉淀得上清A；A与无水硫酸铵混合后，去沉淀留上清B；B分离得胞外酶，即Eyj‑1。本申请增香浓缩液香气含量整体提升明显，蛋白和果胶的物质含量降低明显，粘度降低；醇类、醛酮类和酚类化学物质含量提升，总香味成分提升18.15％，可有效提升烟叶的吸食品质。

本发明授权一种克雷伯氏菌胞外酶Eyj-1在再造烟叶浓缩液中的应用在权利要求书中公布了：1.一种克雷伯氏菌胞外酶Eyj-1的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1种子液的制备： 将保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.24327的克雷伯氏菌Klebsiellasp.HNYJ-1单菌落用接种环接种到LB液体培养基中，于25-40℃，100-200rmin的摇床中培养6-36h，即得到种子液； 2微生物产酶发酵： 种子液与10%浓度的再造烟叶浓缩液按照0.5%-10%：1的体积比混合，先在25-40℃条件下，100-300rmin培养12-72h，得到种子； 在无菌环境下加入提前灭菌的烟末，按照每毫升种子加入0.1g烟末的添加量，将其继续放置于25-40℃条件下，100-300rmin继续震荡12-72h，得到发酵液； 3胞外酶的制备： 将发酵液在4000rmin，4℃条件下低温离心20min，去除沉淀的菌体，得到胞外酶粗酶，胞外酶粗酶与无水硫酸铵按照1:0.2~0.4的质量比在4℃环境中混合，去除沉淀，得到上清A； 上清A与无水硫酸铵按照1:0.4~0.8的质量比在4℃环境中混合，去除沉淀，留上清，得上清B； 上清B采用DEAE-FF阴离子交换柱进行分离，平衡缓冲液为20mmolL的pH8.5的Tris-HCl，洗脱开始后留取未挂柱的穿透组分，经过透析后，得到HNYJ-1胞外酶，命名为Eyj-1。

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