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龙图腾网获悉江苏大学申请的专利一种基于体外消化/细胞共培养模型评价大豆油生物利用率的方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116121328B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211445031.9，技术领域涉及：C12Q1/02；该发明授权一种基于体外消化/细胞共培养模型评价大豆油生物利用率的方法是由肖香;赵延胜;张家艳;范松涛;刘龙成;周玉蓉设计研发完成，并于2022-11-18向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于体外消化/细胞共培养模型评价大豆油生物利用率的方法在说明书摘要公布了：本发明公开一种基于体外消化细胞共培养模型评价大豆油生物利用率的方法，将大豆油乳化使用WPI乳化剂乳化后，依次经过模拟胃液、模拟肠液消化，得到大豆油胃部消化产物；提取大豆油肠道消化产物中的脂肪酸，用二甲基亚砜溶解后与无脂肪酸牛血清白蛋白相连，得到肠道可吸收的大豆油体外消化产物。然后加入细胞共培养模型，进行细胞孵育转运；通过收集细胞共培养模型中的HepG2细胞，进行油红O染色和总甘油三酯含量的测定，得到脂质沉积量，以此评价大豆油的生物利用率。本发明体外消化细胞共培养模型根据大豆油消化特别制定，本发明方法客观科学地评价了大豆油不同代谢阶段的生物利用度，为大豆油的科学健康食用提供标准依据，具有重要的实用价值。

本发明授权一种基于体外消化/细胞共培养模型评价大豆油生物利用率的方法在权利要求书中公布了：1.一种基于体外消化细胞共培养模型评价大豆油生物利用率的方法，其特征在于：包括以下步骤： S1：大豆油乳化：使用WPI乳化剂将大豆油乳化并均质，得到均一的大豆油乳液； S2：胃部消化：将乳化的大豆油乳液在模拟胃液中消化，得到大豆油胃部消化产物； S3：肠道消化：将大豆油胃部消化产物在模拟肠液中消化，得到大豆油肠道消化产物； S4：制备肠道可吸收产物：提取大豆油肠道消化产物中的脂肪酸，用二甲基亚砜溶解后与无脂肪酸牛血清白蛋白相连，得到肠道可吸收的大豆油体外消化产物； S5：细胞共培养：吸弃细胞共培养模型的原有培养液，将得到的肠道可吸收的大豆油体外消化产物加入到Transwell平板的小室内，将新鲜细胞培养基加入基底侧，进行细胞孵育转运； S6：判定生理活性：收集细胞共培养模型中的HepG2细胞，进行油红O染色和总甘油三酯含量的测定，得到脂质沉积量，以此评价大豆油的生物利用率； 其中： 步骤S1中所述大豆油乳化为：将WPI溶于磷酸盐缓冲液中获得WPI溶液，置于4℃冰箱中过夜，使其充分水化；次日取出重新调整WPI溶液的pH为7.0，加入大豆油充分搅拌并均质，直至无油滴漂浮在液面表面，获得大豆油储备乳液；所述WPI溶液的质量体积浓度为1%；所述大豆油储备乳液的质量分数浓度为10%； 步骤S2中所述胃部消化为：将大豆油储备乳液加入模拟胃液中稀释，大豆油乳液浓度控制为1%，在恒温水浴摇床中，37℃下恒温震荡2小时，得到胃部消化产物；所述模拟胃液pH值为2.0，其组分按重量份计由以下成分组成：胃蛋白酶3.2份、氯化钾0.5份、磷酸二氢钾0.12份、碳酸氢钠2.1份、氯化钠2.76份、六水合氯化镁0.02份、碳酸铵0.05份、浓盐酸1.3份、二水合氯化钙0.02份； 步骤S3中所述肠道消化为：将胃部消化产物在37℃恒温水浴锅中孵育10分钟以使温度达到平衡，加入模拟肠液后在恒温水浴摇床中，37℃下恒温震荡2小时，得到肠道消化产物；所述模拟肠液pH值为7.0，其组分按重量份计由以下成分组成：磷酸氢二钾6.79份、氯化钠8.76份、牛胆盐5份、胰脂肪酶1.6份； 步骤S4中所述提取脂肪酸为：取肠道消化产物，加入5倍体积的萃取试剂，振荡混合3分钟后离心取下层氯仿层，用氮气吹干后用二甲亚砜溶解，加入BSA溶液，震荡混匀即可获得大豆油体外消化产物；所述萃取试剂为氯仿-甲醇-去离子水溶液，其各组分的体积比为2:2:1； 步骤S5中所述细胞共培养具体如下： S5-1：将Caco-2细胞和HT29细胞培养生长并长满培养皿皿底80%以上； S5-2：用0.25%胰蛋白酶消化液对步骤S5-1中两株细胞进行消化并分别计数，调整两株细胞悬液密度比为：Caco-2细胞浓度：HT29细胞细胞浓度=7:3； S5-3：将步骤S5-2中的细胞悬液接种于Transwell平板中培养，连续培养20天，以形成肠上皮细胞膜； S5-4：将HepG2细胞用0.25%胰蛋白酶消化液消化并计数，调整细胞悬液密度，然后接种于步骤S5-3中的Transwell平板的基底侧，培养24小时，得到细胞共培养模型，其肠上皮细胞膜的跨膜电阻值达到424.42±3.88Ωcm，碱性磷酸酶活APBL的比值为2.34±0.22，HepG2细胞完全贴壁生长； 步骤S6中所述油红O染色为：吸弃细胞共培养模型中原有培养基，用PBS润洗两遍后加入4%多聚甲醛溶液，室温下固定细胞30分钟后将甲醛溶液吸弃，用PBS溶液润洗三遍后加入油红O染色液，室温下染色1小时，再用PBS洗去浮色后于倒置显微镜下拍照观察； 步骤S6中所述总甘油三酯含量的测定为：吸弃细胞共培养模型原有培养基，用PBS润洗两遍后加入0.25%胰蛋白酶消化液进行消化，待细胞完全脱落后将细胞悬液吸出至EP管中，离心，弃上清；再用PBS洗一遍后用100μLPBS重悬，并吹打成均匀的细胞悬液；冰水浴条件下，每隔30秒于超声破碎机中破碎3～5秒，重复5次，制得细胞匀浆后采用细胞甘油三酯测定试剂盒进行测定。

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