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龙图腾网获悉宁德师范学院申请的专利用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT-PCR引物获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114891897B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202210471939.0，技术领域涉及：C12Q1/6888；该发明授权用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT-PCR引物是由韩坤煌;王艺磊;张子平;刘伟;阮少江;黄伟卿;李菲艳;陈欣欣设计研发完成，并于2021-06-29向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT-PCR引物在说明书摘要公布了：本发明公开了一种大黄鱼DNA甲基化的分子标记的筛选方法及qRT‑PCR引物，属于分子标记技术领域。本发明提供的用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT‑PCR引物，能够筛选具有显著性甲基化和qRT‑PCR差异的基因，进而可在大黄鱼育种中的应用，辅助育种研究，能有效提升大黄鱼优良品种的选育速率。

本发明授权用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法及qRT-PCR引物在权利要求书中公布了：1.用于筛选大黄鱼DNA甲基化的分子标记的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1、从相同养殖条件下的养殖群体中，筛选生长性状具有显著差异的极大个体组和极小个体组； 步骤2、对极大个体组和极小个体组进行全基因组重亚硫酸盐测序，获得全基因组水平上的DNA甲基化遗传图谱，筛选得到两个群体的差异甲基化区域，从中获得具差异甲基化的生长轴功能基因； 步骤3、设计qRT-PCR引物，利用qRT-PCR技术检测具差异甲基化的生长轴功能基因的mRNA表达情况与甲基化的相关性，筛选差异甲基化功能基因； 步骤4、采用用于检测大黄鱼DNA甲基化的分子标记的引物，对差异甲基化功能基因进行单基因DNA甲基化水平与生长性状相关性的验证，获得对生长功能基因的表达水平具有显著调控作用的DNA甲基化位点，获得大黄鱼DNA甲基化的分子标记； 所述大黄鱼DNA甲基化的分子标记包括分子标记fgf11、分子标记fgfrs2、分子标记egflp7和分子标记pdgfrα； 所述分子标记fgf11的核苷酸序列为SEQIDNo.1； 所述分子标记fgfrs2的核苷酸序列为SEQIDNo.2； 所述分子标记egflp7的核苷酸序列为SEQIDNo.3； 所述分子标记pdgfrα的核苷酸序列为SEQIDNo.4； 所述用于检测大黄鱼DNA甲基化的分子标记的引物包括： 核苷酸序列为SEQIDNo.5的fgf11上游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.6的fgf11下游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.7的fgfrs2上游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.8的fgfrs2下游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.9的egflp7上游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.10的egflp7下游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.11的pdgfrα上游引物； 核苷酸序列为SEQIDNo.12的pdgfrα下游引物； 所述DNA甲基化是指通过DNA甲基化转移酶的催化作用将S-腺苷甲硫氨酸分子上的甲基共价转移到胞嘧啶CpG二核苷酸的第5位碳原子上，形成5-甲基胞嘧啶的过程； 所述步骤1中差异甲基化区域为甲基化C位点的差异甲基化区域，所述甲基化C位点的差异甲基化区域需具备如下特征： 至少在一个样品中该区域存在超过5个甲基化C碱基； 对于每个甲基化C位点的测序总深度的要求需在10以上，并且甲基化C位点的支持测序深度要在4以上； 该区域长度应处于40bp至10kb之间； 相邻两个甲基化C位点的距离不高于200bp； 存在2倍以上的平均甲基化水平； 卡方检验P≤0.05。

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