江苏省原子医学研究所;江苏睿源生物技术有限公司王辛宇获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏省原子医学研究所;江苏睿源生物技术有限公司申请的专利一种使用铁螯合剂提高体内细胞示踪准确性的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116999579B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310940928.7,技术领域涉及:A61K51/04;该发明授权一种使用铁螯合剂提高体内细胞示踪准确性的方法是由王辛宇;杨敏;王广基;王婧;严骏杰;潘栋辉;王立振;徐宇平;陈重阳;赵富宽设计研发完成,并于2023-07-28向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种使用铁螯合剂提高体内细胞示踪准确性的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及一种使用铁螯合剂提高体内细胞示踪准确性的方法,包括以下步骤;S1、准备药物材料;S2、准备动物和细胞:准备骨髓细胞,S3、铁螯合剂清除体内游离的89Zr和68Ga,S4、用放射性标记间充质干细胞和骨髓细胞;S5、进行Micro‑PET显像:S6、进行Micro‑PET显像数据处理与分析:S7、体外生物分布;S8、进行药代动力学研究;S9、进行hAlu基因组DNA提取及qPCR检测;S10、建立细胞数与循环阈值标准曲线;S11、进行吸收剂量估计;S12、进行体外细胞实验;S13、最后统计分析。本发明提供一种使用铁螯合剂提高体内细胞示踪准确性的方法,实现使用铁螯合剂去除体内游离放射性金属离子的效果,确保了体内示踪标记细胞的准确性。
本发明授权一种使用铁螯合剂提高体内细胞示踪准确性的方法在权利要求书中公布了:1.铁螯合剂在制备提高体内细胞示踪准确性的试剂中的应用,铁螯合剂为去铁胺DFO、地拉罗司DFS、去铁酮DFP,其特征在于:包括以下步骤; S1、准备材料:准备8-羟基喹啉oxine、柠檬酸钠、醋酸钠、碳酸钠、4-2-羟乙基-1-哌嗪乙磺酸溶液;同时准备二甲基亚砜、地拉罗司DFS、去铁酮、去铁胺以及89Zr-oxalate;同时68Ga3+溶液用4mL0.05MHCl从68Ge68Ga发生器中洗脱,其中放射性最高的0.5mL馏分用于进一步实验; S2、准备动物和细胞:准备人间充质干细胞,人间充质干细胞在添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEMF12培养基中,在37℃和5%CO2湿化气氛中培养;将人间充质干细胞培养第6代用于后续实验; 准备骨髓细胞,骨髓细胞来源于小鼠,将骨髓细胞重悬于PBS溶液中,用于后续实验; S3、铁螯合剂清除体内游离的89Zr和68Ga,具体步骤为:向健康小鼠肌肉注射DFO,DFS以及DFP进行灌胃处理,其中每组3只;在30min后对小鼠尾静脉注射0.37MBq游离89Zr或3.7MBq游离68Ga,此后每天使用三次铁螯合剂; S4、用放射性标记间充质干细胞和骨髓细胞:放射性标记按照常规的方法进行标记;在进行89Zr-oxine标记时,使用1MNa2CO3和0.1MHEPES缓冲液将89Zr4+溶液的pH调整为7;将37MBq89Zr4+溶液与溶解在DMSO中浓度为5μgμL的oxine混合,室温反应15分钟;当进行68Ga-oxine标记时,使用1MNaOAc将68Ga3+溶液的pH调整为5-6,然后与溶解在DMSO中浓度为5μgμL的oxine混合,室温反应15分钟; 对于放射性标记细胞,1×10^6个细胞与0.37MBq68Ga或89Zr-oxine溶液在室温下孵育15分钟,孵育过程中随时吹匀,然后在2000rpm下离心4分钟,最后将68Ga和89Zr标记的细胞用PBS缓冲液洗涤三次;使用放射性活度计测量细胞和上清的放射性,以计算细胞标记效率;标记后,使用放射性薄层色谱分析放射性标记产品的放射化学纯度,以pH=5的0.5M柠檬酸缓冲液为流动相,在薄层玻璃纤维纸上进行放射性瞬态薄层色谱,完整的放射性标记细胞保持在基线,而未结合的89Zr4+和68Ga3+离子随溶剂迁移至前沿; S5、进行Micro-PET显像:所有PET扫描均在Inveonmicro-PET扫描仪上进行;为了监测和比较铁螯合剂对PET图像的影响,C57BL6小鼠经尾静脉注射5×10^6个89Zr放射标记的骨髓细胞、8×10^5个89Zr放射标记的间充质干细胞MSCs和5×10^6个68Ga放射标记的骨髓细胞,每只鼠的放射性分别为180-185KBq,80-90KBq,3.3-3.7MBq;对于68Ga成像,分别在注射后每2、4和6小时进行10分钟的静态PET扫描;对于89Zr成像,分别在注射后30分钟、2小时、4小时、8小时、24小时和48小时进行10分钟的静态PET扫描。
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