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龙图腾网获悉深圳华大智造科技股份有限公司申请的专利一种确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116200458B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202111442944.0，技术领域涉及：C12Q1/6806；该发明授权一种确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法是由夏军;宋喆;史千玉;赵霞;杨新;张恬颖设计研发完成，并于2021-11-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法在说明书摘要公布了：本发明公开了一种确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法。本发明提供了确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法，包括如下步骤：1使用分子标签UMI对多个DNA双链分子的正链和负链进行标记，得到标记分子标签的DNA分子库；2重亚硫酸盐转化所述DNA分子库中的DNA分子，使所述DNA分子中未甲基化修饰的C碱基转化为U碱基，得到转化后DNA分子；3对所述转化后DNA分子依次进行PCR扩增、构建测序文库和测序；判断同一DNA分子正负链甲基化修饰的差异。本发明相对于传统的全基因组甲基化测序，本发明能更精确的检测出DNA分子的甲基化差异，对甲基化的动态变化的检测更准确。

本发明授权一种确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法在权利要求书中公布了：1.一种确定DNA分子正负链甲基化差异的建库测序方法，包括如下步骤： A1使用分子标签UMI对多个DNA双链分子的正链和负链进行标记，得到标记分子标签的DNA分子库；所述DNA分子库中，来源于同一DNA双链分子的正链和负链标记相同的分子标签UMI； 所述使用分子标签UMI对多个DNA双链分子的正链和负链进行标记的方法如下： a1将带有多个分子标签的3端接头组与多个所述DNA双链分子连接，得到连接3端接头的DNA分子； 所述带有多个分子标签的3端接头组由多个带有不同分子标签的3端接头组成； 每个所述3端接头由Top链和Bottom链组成，且3端接头中C碱基为甲基化修饰的C； 所述Top链从5'端到3'端包括如下4个部分： b1第一段固定序列； b2第二段序列，为UMI分子标签，作用为标记同一DNA分子； b3第三段固定序列，作用为5端接头结合部位； b4第四段固定序列，其用于结合测序引物； 所述Top链中第一段固定序列的Tm值需要低于第三段固定序列的Tm值，且5'末端化学修饰； 所述Bottom链为能与Top链中的第一段固定序列反向互补的序列,且在所述Bottom链的3'端进行化学修饰； a2将5端接头延伸连接到所述连接3端接头的DNA分子，得到连接5端和3端接头的DNA分子，即为正链和负链标记相同分子标签的DNA分子，这些DNA分子组成DNA分子库； 所述5端接头由如下2段序列组成： 第一段序列是与所述3端接头的Top链第三段的固定序列完全反向互补的序列， 第二段序列为不与所述3端的TOP链互补的片段； 所述5端接头中的C碱基为甲基化修饰的C，且在延伸连接中的dCTP为甲基化修饰dCTP； A2重亚硫酸盐转化所述DNA分子库中的DNA分子，使所述DNA分子中未甲基化修饰的C碱基转化为U碱基，得到转化后DNA分子； A3对所述转化后DNA分子依次进行PCR扩增、构建测序文库和测序；根据测序结果中分子标签相同的DNA分子的正链和负链的数据，判断同一DNA分子正负链甲基化修饰的差异； 所述方法用于非疾病诊断目的。

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