河南农业大学李苗云获国家专利权
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龙图腾网获悉河南农业大学申请的专利基于双重识别效应抗生素-磁珠的食源性芽孢快速分离富集方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116024206B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-03-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202310249614.2,技术领域涉及:C12N13/00;该发明授权基于双重识别效应抗生素-磁珠的食源性芽孢快速分离富集方法及应用是由李苗云;梁栋;李梦雅;刘世杰;郭世良;赵改名;朱瑶迪;赵莉君;马阳阳设计研发完成,并于2023-03-15向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于双重识别效应抗生素-磁珠的食源性芽孢快速分离富集方法及应用在说明书摘要公布了:本发明属于食源性致病微生物检测领域,涉及基于双重识别效应抗生素‑磁珠的食源性芽孢快速分离富集方法及应用。将待测样加入缓冲液后与Van‑Fe3O4磁珠和Amp‑Fe3O4磁珠混合孵育,静置,利用磁场作用将磁珠和细菌营养体结合物吸附在一侧去除细菌营养体,取上清液经离心收集富集物。本发明方法通过将两种抗生素磁珠联用,在双重识别效应作用下实现了复杂微生物体系细菌菌体和芽孢的快速分离富集,所得到的芽孢分离富集效率可达99%,解决了现有技术中单一抗生素磁珠难以实现复杂体系中微生物的全部捕获的技术问题,且本发明提供的方法对芽孢的结构和状态无干扰、无影响。为复杂体系中食源性芽孢快速分离富集提供新思维新手段。
本发明授权基于双重识别效应抗生素-磁珠的食源性芽孢快速分离富集方法及应用在权利要求书中公布了:1.基于双重识别效应抗生素-磁珠的食源性芽孢快速分离富集方法,其特征在于,步骤如下:1Fe3O4纳米颗粒的制备:将六水合氯化铁、三水合醋酸钠和十二烷基磺酸钠溶解在溶剂I中,搅拌后进行微波反应,反应结束后冷却至室温,洗涤,干燥,得到磁性Fe3O4纳米颗粒;所述步骤1中六水合氯化铁、三水合醋酸钠和十二烷基磺酸钠的摩尔比为9~11:3~5:2~4,溶剂I为乙二醇;所述步骤1中微波反应的操作为:先在145~155℃下加热17~22min,然后在190~210℃下加热35~45min; 2Fe3O4纳米颗粒羧基化处理:将3-氨基丙基三乙氧基硅烷、戊二酸酐和二甲基甲酰胺混合后在水浴条件下进行第一次搅拌,然后依次加入步骤1所得的磁性Fe3O4纳米颗粒、H2O和DMF,继续在水浴条件下进行第二次搅拌,洗涤后,干燥,得到表面羧基化的Fe3O4磁性纳米颗粒粉末;3-氨基丙基三乙氧基硅烷和二甲基甲酰胺的体积比为1.70~1.78:50~65,每添加1.70~1.78mL3-氨基丙基三乙氧基硅烷需添加0.80~0.88g戊二酸酐,3-氨基丙基三乙氧基硅烷与H2O和DMF的质量体积比为1.70~1.78:8~10:95~105,每添加1.70~1.78mL3-氨基丙基三乙氧基硅烷需要添加1.1~1.3g磁性Fe3O4纳米颗粒; 3VanFe3O4和AmpFe3O4抗生素磁珠的制备:将步骤2所得的表面羧基化的Fe3O4磁性纳米颗粒粉末、Van和Amp分别活化,并分别将活化后的表面羧基化的Fe3O4磁性纳米颗粒粉末与活化后的Van和活化后的Amp孵育,孵育后用PBS缓冲液多次洗涤后重悬在缓冲液中,得到VanFe3O4抗生素磁珠和AmpFe3O4抗生素磁珠;所述步骤3中活化是指:将表面羧基化的Fe3O4磁性纳米颗粒粉末、Van和Amp分别浸于EDC溶液和NHS溶液中进行活化; 4食源性芽孢快速分离富集方法:将待测样加至缓冲液后与VanFe3O4抗生素磁珠和AmpFe3O4抗生素磁珠混合并孵育,静置,取上清液经离心后收集富集物即为食源性芽孢。
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