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龙图腾网获悉细胞生态海河实验室;中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)申请的专利一种Trmt61a酶活性缺失的斑马鱼模型的制备获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120944974B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-27发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511477265.5，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种Trmt61a酶活性缺失的斑马鱼模型的制备是由王璐;董振坤设计研发完成，并于2025-10-16向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种Trmt61a酶活性缺失的斑马鱼模型的制备在说明书摘要公布了：本发明涉及基因技术领域，尤其涉及一种Trmt61a酶活性缺失的斑马鱼模型的制备，用于制备稳定遗传trmt61atrmt61aD181AD181A‑P2A‑EGFP‑P2A‑EGFP敲入的斑马鱼品系。本发明利用CRISPRCas9技术将trmt61aD181Atrmt61aD181A突变位点特异性引入斑马鱼基因组中，获得了Trmt61a催化活性缺失、tRNAm11A修饰水平显著降低的斑马鱼模型。该斑马鱼模型填补了现有研究空白，为tRNAm11A表观遗传修饰相关的生物发育调控机制研究、疾病如恶性肿瘤、造血功能异常病理机制解析提供了可用的体内研究模型，可直接用于探究该表观遗传修饰在发育和疾病中的核心作用。

本发明授权一种Trmt61a酶活性缺失的斑马鱼模型的制备在权利要求书中公布了：1.一种Trmt61a酶活性缺失的斑马鱼模型的制备方法，其特征在于，用于制备trmt61aD181A-P2A-EGFP敲入的斑马鱼品系，包括如下步骤： S100、利用无缝DNA片段拼接技术，构建trmt61aD181A-P2A-EGFP-trmt61a-3’UTR供体质粒； 其中，无缝DNA片段拼接技术包括重叠延伸PCR和Gibson组装技术，包括如下步骤： S110、根据重叠延伸PCR和Gibson组装技术的要求，设计引物； 其中，所述引物包括Intron2F、Intron2R、CDSF、Trmt61aD181AR、CDSR、Trmt61aD181AF、3UTRF、3UTRR、P2AF、P2AR、EGFPF、EGFPR、VECTORF和VECTORR； 其中，引物Intron2F的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示； 引物Intron2R的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示； 引物CDSF的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示； 引物CDSR的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示； 引物Trmt61aD181AF的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示； 引物Trmt61aD181AR的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示； S120、利用引物Intron2F和Intron2R进行PCR扩增，得到内含子2序列片段； 利用引物CDSF和Trmt61aD181AR进行PCR扩增，得到携带D181A点突变的Trmt61aCDS序列片段的前半部分； 利用引物CDSR和Trmt61aD181AF进行PCR扩增，得到携带D181A点突变的Trmt61aCDS序列片段的后半部分； 将携带D181A点突变的Trmt61aCDS序列片段的前半部分和携带D181A点突变的Trmt61aCDS序列片段的后半部分混合后作为模板，利用引物CDSF和CDSR进行PCR扩增，得到Trmt61aD181ACDS序列片段； 利用引物3UTRF和3UTRR进行PCR扩增，得到序列片段； 利用引物P2AF和P2AR进行PCR扩增，得到P2A序列片段； 利用引物EGFPF和EGFPR进行PCR扩增，得到EGFP序列片段； 利用引物VECTORF和VECTORR进行PCR扩增，得到载体序列片段； S130、将步骤S120得到的内含子2序列片段、Trmt61aD181ACDS序列片段、序列片段、P2A序列片段、EGFP序列片段和载体序列片段进行Gibson组装，得到trmt61aD181A-P2A-EGFP-trmt61a-3’UTR供体质粒； S200、将trmt61aD181A-P2A-EGFP-trmt61a-3’UTR供体质粒、靶向trmt61a基因的gRNA和Cas9蛋白注射到一细胞时期的野生型斑马鱼胚胎中，经过筛选和培养，得到trmt61aD181AP2A-EGFP敲入的斑马鱼品系； 其中，靶向trmt61a基因的gRNA位于trmt61a基因的第2个内含子上，其核苷酸序列如SEQIDNO.15所示。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人细胞生态海河实验室;中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)，其通讯地址为：300450 天津市滨海新区滨海科技园月新路以北、惠新路以东渤龙产业园1-3号楼2-1-101；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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