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温州市洞头区海洋经济科技创新中心林立东获国家专利权

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龙图腾网获悉温州市洞头区海洋经济科技创新中心申请的专利一种羊栖菜受精卵悬浮培养新种质创制及评价方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120391318B

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510508860.4,技术领域涉及:A01G33/00;该发明授权一种羊栖菜受精卵悬浮培养新种质创制及评价方法是由林立东;张鹏;王铁杆设计研发完成,并于2025-04-22向国家知识产权局提交的专利申请。

一种羊栖菜受精卵悬浮培养新种质创制及评价方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种羊栖菜受精卵悬浮培养新种质创制及评价方法,包括野生羊栖菜地缘亲本的选择、隔离养殖及单位质量评价;亲本高值性状品系雌雄株筛选、隔离养殖及敌害生物防治;高值性状品系雌雄株附生敌害生物的去除;高值性状品系雌雄株侧生枝室内暂养的最适环境因子创建;亲本高值性状品系雌雄株侧生枝室内暂养的处理与暂养时间;新种质受精卵的分类收集、杂质去除及清洗,新种质受精卵的悬浮系创建;新种质胚至幼孢子体悬浮生长发育阶段悬浮系的典型敌害生物防治;新种质幼孢子体的夹绳与室内暂养;新种质幼孢子体的海区放养;亲本与子代新种质的评价方法;可为羊栖菜新种质创制、新种质品质评价及新品种培育提供科学的、标准的操作与评价方法。

本发明授权一种羊栖菜受精卵悬浮培养新种质创制及评价方法在权利要求书中公布了:1.一种羊栖菜受精卵悬浮培养新种质创制及评价方法,其特征在于: 包括以下步骤: S1野生羊栖菜地缘亲本的选择、隔离养殖及单位质量评价; S2野生羊栖菜亲本高值性状品系雌雄株筛选、隔离养殖及敌害生物防治; S3野生羊栖菜高值性状品系雌雄株附生敌害生物的去除; S3.1野生羊栖菜高值性状品系雌雄株室内暂养 S3.1.1附生大型藻类的去除 手工去除; S3.1.2附生动物的去除 室温淡水浸泡20min~25min,低渗杀死附生动物,新鲜、过滤、杀菌海水冲洗3次~5次; S3.1.3附生微藻的去除 藻体鲜重与柠檬酸C溶液的质量kg:体积L为1:3,柠檬酸的浓度为1.5mgml,浸泡时间为5min~8min,取出后室温淡水冲洗3次~5次,新鲜、过滤、杀菌海水冲洗3次~5次; S3.2野生羊栖菜高值性状品系雌雄株处理 S3.2.1侧生枝筛选与茎去除 人工剪切去除鲜藻体一级或二级侧生枝茎,保留生殖托密集着生的二级或三级侧生枝; S3.2.2雌雄株侧生枝置放与质量比例 根据培养托盘的实际面积分配侧生枝,分配标准为侧生枝之间不相互叠加,以此保证光照均一,雌株与雄株的混合质量比kg:kg为1:1; S4野生羊栖菜高值性状品系雌雄株侧生枝室内暂养的最适环境因子创建 S4.1室内暂养最适水环境 培养海水: ①新鲜:取当日涨潮清澈海水,自然沉降3h~4h ②过滤:上清海水经280目~300目纱绢网过滤 ③高温杀菌:过滤海水加热至80℃~90℃,高温灭菌30min~40min,消杀动物卵、微生物、微藻及大型海藻幼体,自然降温至室温; ④pH值:0.05molLNaOH溶液和0.05molLHCl溶液调杀菌后海水的pH值至7.8~8.3; ⑥盐度:28~33; ⑦营养盐:用NaNO3和KH2PO3配置N:P=10:1的海水溶液,浓度为10NgL或1PgL,营养盐与培养海水的体积比V:V为0.6~0.8ml:L; S4.2培养室、光照培养架和暂养装置 S4.3设置最适温度、光强和光周期 温度:23℃~25℃; 光强:200µmol•m-2•s-1~280µmol•m-2•s-1; 光周期:14h:10h~12h:12h; S5野生羊栖菜亲本高值性状品系雌雄株侧生枝室内暂养的处理与暂养时间 S5.1侧生枝室内暂养处理 每日更换培养组总培养海水的12容量海水,且隔6h~8h翻动侧生枝一次,保障各侧生枝生殖托接受均匀的光照; S5.2侧生枝室内暂养时间 侧生枝室内暂养5d~7d; S6羊栖菜新种质受精卵的分类收集、杂质去除及清洗 使用260目~280目纱绢网收集受精卵,30目~50目纱绢网去除气囊、生殖托,受精卵置2000mL烧杯中,添加1500mL新鲜过滤海水,搅匀后自然沉降2min~3min,弃上层悬浊液,去除悬浮微小杂质,循环次操作5次~7次,得受精卵鲜纯品,品系不同需分别进行受精卵收集和杂质去除; S7羊栖菜新种质受精卵的悬浮系创建 S7.1羊栖菜新种质受精卵的定量分装 去除受精卵鲜纯品多余水分,统计受精卵体积密度,在3000ml或5000ml标准三角锥瓶中定量分装8000个~10000个受精卵,加入新鲜过滤海水,受精卵鲜纯品数量个与海水体积ml比区间为10:1~10:3,按品系不同进行分类分装并标记; S7.2羊栖菜新种质受精卵悬浮培养的最适环境创建 S7.2.1悬浮培养最适水环境 新鲜、过滤、高温杀菌、pH值、盐度和营养盐配置参照S4.1方法,营养盐与培养海水的体积比V:V为0.5~0.7ml:L~0.6~0.8ml:1L,最适水环境条件悬浮培养期间保持不变; S7.2.2悬浮培养最适光强、光周期、温度、曝气条件 最适光强:50µmol•m-2•s-1~60µmol•m-2•s-1; 光周期:14h:10h~12h:12h; 温度:23℃~24℃; 曝气:辅助曝气; S7.2.3羊栖菜新种质受精卵的悬浮培养方式 羊栖菜受精卵悬浮培养初期采用磁力搅拌+曝气悬浮培养,在培养至8d~10d后,羊栖菜受精卵已生长发育为胚,胚生长发育期开始,采用悬浮培养装置进行悬浮培养,实施曝气悬浮培养; S7.3羊栖菜新种质胚至幼孢子体悬生长发育阶段悬浮培养的低密度定量分装 胚至幼孢子体生长发育阶段,每19d~21d每瓶12等体积密度分装一次,随着培养时间的逐渐延长,逐级低密度定量分装,首次低密度分装由8000个~10000个降至4000个~5000个,二次低密度由4000个~5000个降至2000个~2500个,三次低密度由2000个~2500个降至1000个~1200个,最后低密度由1000个~1200个降至400个~500个; S8羊栖菜新种质胚至幼孢子体悬浮生长发育阶段悬浮系的典型敌害生物防治 S8.1敌害动物防治方法 在S7培养期间,定期镜检胚或幼孢子体,若发现悬浮培养液有敌害动物,每10d~12d培养期使用超纯水浸泡20min~25min,低渗消杀敌害动物; S8.2敌害蓝藻防治方法 在S7培养期间,定期镜检胚或幼孢子体,若发现胚或幼孢子体有附生蓝藻迹象,使用30万计~60万计L青霉素海水液浸泡培养24h~48h,消杀蓝藻后用过滤海水清洗3次~5次,再使用过滤海水继续悬浮培养,培养条件不变; S8.3敌害绿藻防治方法 在S7培养期间,定期镜检胚或幼孢子体,若发现胚或幼孢子体有附生绿藻迹象,使用1.5mgml柠檬酸液浸泡6min~8min,淡水冲洗3次~5次,随后使用过滤海水冲洗2次~3次,再使用过滤海水继续悬浮培养,培养条件不变; S9羊栖菜新种质幼孢子体的夹绳与室内暂养 将基叶长1.5cm~2.0cm的幼孢子体夹至直径0.4cm的棉绳或纤维绳上,间距3cm~5cm,基叶长小于1.5cm的幼孢子体继续进行悬浮培养,直至基叶生长至1.5cm~2.0cm后再夹绳,夹绳后的幼孢子体室内暂养15d~20d; S10羊栖菜新种质幼孢子体的海区放养 S11野生羊栖菜亲本与子代新种质的评价方法 S11.1野生羊栖菜亲本与子代性状评价 S11.2野生羊栖菜亲本与子代产量评价 S11.3野生羊栖菜亲本、子代干品原料与粗加工产品的加工比评价 S11.4野生羊栖菜亲本、子代粗加工产品复水率评价 S11.5野生羊栖菜亲本、子代成藻与产品主要营养成分评价 S11.6野生羊栖菜子代——新种质遗传稳定性分析。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术,可联系本专利的申请人或专利权人温州市洞头区海洋经济科技创新中心,其通讯地址为:325000 浙江省温州市洞头区北岙街道海兴路136号行政服务中心四楼;或者联系龙图腾网官方客服,联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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