西安九州再生医学集团有限公司王建超获国家专利权
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龙图腾网获悉西安九州再生医学集团有限公司申请的专利一种质粒载体和构建方法及应用该质粒载体构建在iPSC中响应IFN-γ诱导的外源基因表达系统及其方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118910164B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411108270.4,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种质粒载体和构建方法及应用该质粒载体构建在iPSC中响应IFN-γ诱导的外源基因表达系统及其方法是由王建超;马瑞仙;吴菊艳;王李风;陈静;吴昊;朱艳丽;聂苏秦设计研发完成,并于2024-08-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种质粒载体和构建方法及应用该质粒载体构建在iPSC中响应IFN-γ诱导的外源基因表达系统及其方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种质粒载体,该质粒载体包含基因切割载体和模板修复载体。一种质粒载体的构建方法,基因切割载体构建,基因模板修复载体构建。一种外源基因表达系统,所述外源基因表达系统是指通过CRISPRCas9技术构建一种在IFN‑γ刺激下,可调控和高表达外源基因的iPS细胞株;构建外源基因表达系统的方法,IFN‑γ诱导表达外源基因iPS细胞电转和筛选,IFN‑γ诱导表达外源基因iPS细胞株构建。本发明在不引入外源启动子及转录终止序列等调控序列的情况下,通过IFN‑γ控制引入的多个外源基因的表达水平,即无IFN‑γ处理时,外源基因同B2M基因一同生理水平低表达,IFN‑γ处理时,外源基因高水平表达,有效避免了外源基因表达调控元件的介入,及其调控外源基因表达的不均一性。
本发明授权一种质粒载体和构建方法及应用该质粒载体构建在iPSC中响应IFN-γ诱导的外源基因表达系统及其方法在权利要求书中公布了:1.一种质粒载体,其特征在于:该质粒载体包含基因切割载体和模板修复载体; 所述基因切割载体为靶向B2M基因终止密码子的sgRNA和Cas9蛋白表达载体;所述模板修复载体以B2M基因终止密码子附近切割位点两侧600bpDNA序列为双翼,其中插入了HLA-G、CD47和EGFP基因编码序列的质粒载体; 所述基因切割载体以px459载体为骨架,构建gRNACas9表达载体,所述gRNACas9表达载体基因表达结构为:U6启动子序列+B2M-TAG-sgRNA转录序列+EF1a启动子+Cas9编码序列,即为基因切割载体,所述基因切割载体命名为px459-B2M-TAG-sgRNA; 所述模板修复载体以pUC57克隆载体为骨架,包含切割位点上游同源序列LA、蛋白融合linker序列、HLA-G编码序列、P2A序列、CD47基因编码序列、T2A序列、EGFP编码序列及切割位点下游同源序列RA,即为模板修复载体,其核酸序列如SEQIDNO2所示,所述模板修复载体命名为pUC57-HLA-G-CD47-EGFP。
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