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龙图腾网获悉广州市食品检验所(广州市酒类检测中心)申请的专利一种可提高荧光放大效应的标记方法及其在生物毒素检测中的应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115541870B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-27发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211196796.3，技术领域涉及：G01N33/532；该发明授权一种可提高荧光放大效应的标记方法及其在生物毒素检测中的应用是由梁俊发;黄斌;叶秋雄;王丽兰;易云婷;彭程;黄得凤;陈佩仪;张彬彬;林嘉健;黄铁成;杨嘉鑫威;容俊楠;李燕莹设计研发完成，并于2022-09-27向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种可提高荧光放大效应的标记方法及其在生物毒素检测中的应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种可提高荧光放大效应的标记方法及其在生物毒素检测中的应用，可提高荧光放大效应的标记方法包括以下步骤：S1：双重荧光微球的制备：S1.1：进行黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体的羧基位点封闭；S1.2：对已封闭的黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体的氨基位点进行偶联；S1.3：将已偶联的黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体进行活化；S1.4：将已活化的黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体与磁性荧光微球偶联。本发明提供的可提高荧光放大效应的标记方法及其在生物毒素检测中的应用具有能够提高产品的灵敏度、检测限的能力，可减少样品基质的干扰带来的检测差异的优点。

本发明授权一种可提高荧光放大效应的标记方法及其在生物毒素检测中的应用在权利要求书中公布了：1.一种可提高荧光放大效应的标记方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：双重荧光微球的制备： S1.1：进行黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体的羧基位点封闭：用0.1MPBS将黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体稀释至0.2mgmL，取0.5mL稀释后的抗体至离心管中，依次加入60μLmL0.1MEDC、30μL0.1MNHS、0.1mL1.0M氨水，并调节混合液的PH至7.5-8.0，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀反应30min后，以0.1MPBS为洗脱液，用分子量5KD的超滤离心管离心洗脱，除去上清液，重复洗脱3次后，用0.01MPBS定容至0.5mL； S1.2：对已封闭的黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体的氨基位点进行偶联：取S1.1中已封闭的抗体0.5mL，加入0.1mL0.2MNHS-PEG-COOH，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀反应60min，以0.01MPBS为洗脱液，用分子量15KD的超滤离心管离心洗脱，除去上清液，重复洗脱3次后，用0.01MPBS定容至0.5mL； S1.3：将已偶联的黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体进行活化：取S1.2中已偶联的抗体0.5mL至离心管中，依次加入40μL0.1MEDC、20μL0.1MNHS，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀反应30min，以0.01MPBS为洗脱液，用分子量5KD的超滤离心管离心洗脱，除上去清液，用0.01MPBS定容至0.1mL； S1.4：将已活化的黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮抗体与磁性荧光微球偶联，取粒径为200～500nm的磁性时间分辨荧光微球40μL，加入0.36mL0.1MMES，手动摇晃1min，4℃条件下12000rmin离心15min，弃去上清液，加入0.4mL0.02MMES溶液，超声混匀1min，加入S1.3中已活化的抗体0.1mL，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀反应30min，将偶联后的离心管放置在磁力架上，静置5min，除去上清液后，再加入0.4mL0.02MMES溶液，超声混匀1min，将离心管放置在磁力架上，静置5min，除去全部液体，重复2次后，加入0.5mL0.02MMES溶液，超声分散1min，备用； S1.5：对偶联后的磁性荧光微球进行封闭：取S1.4中IgG偶联后的磁性荧光微球0.5mL，加入0.15mL0.1MNHS-生物素，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀反应60min，将偶联后的离心管放置在磁力架上，静置5min，除去全部液体后，加入0.4mL0.02MMES溶液，超声混匀1min，将离心管放置在磁力架上，静置5min，除去全部液体，重复此步骤2次，加入0.5mL0.02MMES溶液，超声分散1min； S1.6：对放大信号磁性荧光微球进行标记，取粒径为10～30nm的聚苯乙烯时间分辨荧光微球0.1mL，加入0.9mL0.1MMES，手动摇晃1min，4℃条件下15000rmin离心20min，弃去上清液，加入1.0mL0.1MMES，超声分散1min，依次加入0.2mL0.1MEDC、0.1mL0.1MNHS，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀反应30min，4℃条件下15000rmin离心20min，弃去上清液，加入1mL0.1MMES，超声分散1min，4℃条件下15000rmin离心20min，弃去上清液，加入1mL0.1MMES，超声分散1min，加入2mgmL的链霉亲和素0.5mL，室温条件下在摇床上轻微震荡混匀反应30min，4℃条件下15000rmin离心20min，弃去上清液，加入1mL0.1MMES，超声分散1min，加入0.1mL10%BSA，室温条件下在摇床上轻微震荡混匀反应60min，4℃条件下15000rmin离心20min，弃去上清液，加入1mL0.02MMES，超声分散1min，4℃条件下15000rmin离心20min，弃去上清液，加入1mL0.02MMES，超声分散1min； S1.7：取S1.5中已标记封闭磁性荧光微球一部分与S1.6中已标记封闭的磁性荧光微球一部分混合，室温条件下，在摇床上轻微震荡混匀，将偶联后的离心管放置在磁力架上静置一段时间，除去全部液体，将离心管取下磁力架，加入适量0.01MMES溶液，超声混匀，将离心管放置在磁力架上，静置一段时间，除去全部液体，重复此步骤2次，加入一定量的保存溶液，之后进行超声分散； S1.8：进行质控线荧光微球的标记； S2：制备硝酸纤维素膜： S2.1：制备包被液； S2.2：将赛多利斯140膜裁切成30cm的小段，将裁切后的膜粘贴在底板上，之后放到多点划膜机上，将S2.1中所制备的各包被液体同时包被在硝酸纤维素膜上； S3：进行结合垫与样品垫的制备： S3.1：将样品垫处理液倒在塑料盘中，将玻璃纤维放在盘中浸泡一定时间后取出，去除表面的残余液体后，放鼓风干燥箱中烘烤一段时间； S3.2：将结合垫处理液倒在塑料盘中，将玻璃纤维放在盘中浸泡一定时间后取出，去除表面的残余液体后，放鼓风干燥箱中烘烤一段时间； S3.3：已标记荧光微球的混合； S3.4：进行荧光信号结合垫的喷涂； S4：进行检测卡的组装： S4.1：进行大板组装，将喷镀好的结合垫裁成小条，将处理好样品垫裁成小条，将吸水纸裁切成小条，撕开硝酸纤维素膜检测线下端的胶，贴上结合垫，将样品垫贴在结合垫下方，底端与PVC底板齐平；撕开硝酸纤维素膜质控线上端的胶，贴上吸水纸； S4.2：对大板进行裁切，裁切后的试纸条放入塑料卡壳中并压紧，之后装入铝箔袋中，最后用热塑封口机封口，制得卡条； S5：样本处理与检测： S5.1：对样本进行处理，称取适量干燥的食品样品于离心管中，加入适量的70%甲醇-水，之后依次进行涡旋震荡、离心，取上清液，和样品稀释液混匀后，即制成待测液； S5.2：取S5.1中的待测液100µL加入到S4.2中组好的卡条中，室温条件下反应15min，之后可读取结果。

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