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龙图腾网获悉江苏华诺泰生物医药科技有限公司申请的专利一种Vero细胞流感病毒疫苗的制备方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120924503B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-17发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511456761.2，技术领域涉及：C12N7/00；该发明授权一种Vero细胞流感病毒疫苗的制备方法是由王海龙;齐舒雅;赵斌;刘鹏;顾文龙设计研发完成，并于2025-10-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种Vero细胞流感病毒疫苗的制备方法在说明书摘要公布了：本发明涉及一种Vero细胞流感病毒疫苗的制备方法，属于病毒的培养技术领域。在流感病毒的培养中培养基同时添加红藻蛋白与大豆蛋白水解物，前者经低温硫酸铵沉淀与PD‑10脱盐柱纯化，保持天然构象，可激活整合素‑FAK‑Src及IGF‑1R信号通路，促进细胞黏附与增殖；后者含大豆分离蛋白、多糖及RGD基序肽，可在基底形成黏附膜并通过整合素介导黏附。两者协同改善细胞贴壁、代谢稳态与抗氧化能力，使Vero细胞在无血清条件下高密度生长并高效复制流感病毒，病毒滴度TCID5050达8.5log1010mL，适用于工业化疫苗生产。

本发明授权一种Vero细胞流感病毒疫苗的制备方法在权利要求书中公布了：1.一种Vero细胞流感病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤S1 Vero细胞培养将Vero细胞在含有3‑10wt%血清的培养基中传代1‑2代后，转入无血清Vero细胞培养基中传代3‑8代，建立无血清Vero细胞库； 步骤S2 流感病毒的接种与增殖将流感病毒毒株在鸡胚中传代1‑2代后，于无血清Vero细胞培养基中进行适应性传代3‑8代，建立毒种库； 在生物反应器中，向无血清Vero细胞中加入5‑15gL的微载体进行高密度悬浮培养，当细胞密度达到0.5×106‑2.0×106cellsmL时接种病毒；培养条件为温度35‑38℃、pH 7.0‑7.5、溶氧保持30%‑60%饱和空气、搅拌速度50‑120rpm；培养基为无血清Vero细胞培养基； 步骤S3 病毒的纯化与灭活向病毒液中加入2‑6wt%的沉淀剂，4℃静置8‑24h后离心收集病毒沉淀；经膜过滤除菌后，按质量比1:3000‑1:5000加入灭活剂，在2‑8℃条件下灭活48‑96小时，并在30‑40℃条件下水解2‑5h； 经离子交换层析和超滤浓缩，得到疫苗原液； 所述无血清Vero细胞培养基包括含非必需氨基酸的MEM基础培养基和添加组分；添加组分中，红藻蛋白的浓度为400mgL，大豆蛋白水解物的浓度为400mgL，转铁蛋白的浓度为6mgL，重组表皮生长因子0.01mgL，成纤维细胞生长因子2mgL，重组胰岛素8mgL，重组纤连蛋白2.5mgL，多聚‑L‑赖氨酸1.4mgL，亚硒酸钠0.03mgL，硫酸锌0.01mgL，肌醇40mgL，乙醇胺11mgL，聚醚F‑68 0.3 mgL，丙酮酸钠4mgL； 所述红藻蛋白的制备方法为：培养基为pH 2.0‑3.0的BG‑11培养基，于容积为5‑10L的平板气升式光生物反应器中进行混养培养，温度为35‑40℃，光照强度为100‑200μmol photons·m‑2·s‑1，通气量为100‑200NLh，并在指数生长期末收获经洗涤的藻细胞；将藻细胞在0.05‑0.20molL、pH 6.5‑7.5且含300‑700mmolL盐的PBS缓冲液中，以珠磨方式多次循环破碎并离心，收集上清；所得粗提液经40%‑100%饱和度的硫酸铵分级沉淀、脱盐处理获得蛋白溶液；将所述蛋白溶液在65‑75℃条件下加热10‑30分钟灭活后离心去除沉淀，并将上清液冷冻干燥得到红藻蛋白；所述藻细胞为红藻Galdieria sulphuraria 074G； 所述大豆蛋白水解物的制备方法为：将15‑25g大豆蛋白加入80‑120mL水中，在80‑95℃下加热5‑15分钟，随后冷却至45‑55℃；加入0.5‑1.5g碱性蛋白酶，在150‑250rpm、pH 7.0‑8.0、45‑55℃的条件下酶解8‑16小时；将反应液于90‑105℃加热5‑15分钟以灭酶活性，冷却至室温后在6000‑10000rpm条件下离心15‑25分钟，弃沉淀，收集上清液；将所述上清液冷冻干燥得到大豆蛋白水解物。

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