青岛农业大学杨英杰获国家专利权
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龙图腾网获悉青岛农业大学申请的专利一种梨体细胞胚胎发生的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119422884B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-17发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411619548.4,技术领域涉及:A01H4/00;该发明授权一种梨体细胞胚胎发生的方法是由杨英杰;李雪萍;朱莹莹;王焕生;李鼎立;刘建龙;王然;崔振华;宋健坤设计研发完成,并于2024-11-13向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种梨体细胞胚胎发生的方法在说明书摘要公布了:本发明属于生物技术领域,具体涉及一种梨体细胞胚胎发生的方法。包括以下步骤:果实采集与外植体的获得;以未成熟合子胚为外植体诱导体细胞胚发生;以未成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织;胚性愈伤组织的继代与胚性保持;胚性愈伤组织的体细胞胚胎发生;再生植株的壮苗生根培养;炼苗移栽。本发明涉及的由未成熟合子胚以及胚性愈伤组织为外植体的两种体细胞胚胎诱导途径再生效率高,可达100%,遗传稳定性好,普适性好,从外植体到再生植株的诱导时间短,是一条梨离体快繁的高效途径,同时可以在一定程度上帮助提高梨遗传转化效率,增强转基因植株的遗传稳定性,降低转基因植株嵌合体的发生几率。
本发明授权一种梨体细胞胚胎发生的方法在权利要求书中公布了:1.一种梨体细胞胚胎发生的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1果实采集与外植体的获得于花后30‑60 d采集梨果实,表面消毒后,将果实剖开,取出未成熟种子,挑开种皮,挤出未成熟合子胚作为外植体; 2以未成熟合子胚为外植体诱导体细胞胚发生将步骤1获得的外植体接种于含1.0 mgL NAA,0.2‑1.5 mgL TDZ,30 gL 蔗糖,7 gL 琼脂,pH=5.82的MS培养基上,置于25 ℃、黑暗下培养20‑25 d,由球形胚,经心形胚和鱼雷型胚发育过程,形成成熟体细胞胚,30 ‑35 d体细胞胚即可萌发形成再生芽; 3以未成熟合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织将步骤1获得的外植体接种于含1.0‑2.0 mgL 2,4‑D ,0.5 mgL KT,30 gL 蔗糖,7 gL 琼脂,pH=5.82的MS培养基上,置于25 ℃、黑暗下培养,30 d得到胚性愈伤组织; 4胚性愈伤组织的继代与胚性保持将步骤3获得的胚性愈伤组织进行继代与增殖,在含1.0‑2.0 mgL 2,4‑D ,1.0 mgL 6‑BA,30 gL 蔗糖,7 gL 琼脂,pH=5.82的MS培养基上,置于25 ℃、黑暗下培养,保持愈伤组织胚性; 5胚性愈伤组织的体细胞胚胎发生将步骤3和4中获得的胚性愈伤组织转接到含1.0‑3.0 mgL NAA ,0.2‑1.5 mgL TDZ,30 gL 蔗糖,7 gL 琼脂,pH=5.82的MS培养基上,置于25 ℃、黑暗下培养,诱导体细胞胚胎的形成与发育; 6再生植株的壮苗生根培养将步骤2和5中得到的体细胞胚胎再生小植株置于含0.05‑0.2 mgL IBA,30 gL 蔗糖,7 gL 琼脂,pH=5.82的MS生根培养基中,在培养温度为25℃,光照强度1500lux,光照时间16 hd的条件下培养30 d,得到完整自根苗; 7炼苗移栽。
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