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龙图腾网获悉北京科技大学申请的专利以微球反射镜作为探针的显微分析方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116338169B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211679215.1，技术领域涉及：G01N33/543；该发明授权以微球反射镜作为探针的显微分析方法是由时国庆;李紫静;来雅珺;陈巧珍;李泽鹏;王一笑设计研发完成，并于2022-12-26向国家知识产权局提交的专利申请。

本以微球反射镜作为探针的显微分析方法在说明书摘要公布了：本发明提供一种以微球反射镜作为探针的显微分析方法，包括以下步骤：1SiO22微球的羧基化修饰，包括羧基化修饰；活化羧基化二氧化硅微球表面羧基；2抗体在探针微球和捕获微球上的偶联；3与目标物的反应；4显微图像的获取；5定量分析，使用图像分析软件对获得的图像进行分析。本发明利用配备数码相机的光学显微镜实现了粒径小于300nm的探针微球的检测，成本低廉；样品与捕获及探针微球反应后可以直接检测，无需分离；利用不同颜色、粒径编码的捕获微球及相应的抗体可以实现多目标物同时检测；样品用量少，只需ul级指尖血即可；具有很高的灵敏度，理论上可以实现单分子检测。

本发明授权以微球反射镜作为探针的显微分析方法在权利要求书中公布了：1.以微球反射镜作为探针的显微分析方法，其特征在于，包括以下步骤： 1SiO2微球的羧基化修饰 羧基化修饰：将不同颜色和粒径的单分散二氧化硅微球分别超声分散10-20min后，分别取一定量微球加入到硅烷偶联剂γ-氨丙基三乙氧基硅烷和丁二酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，反应完成后离心、洗涤，得到羧基化的二氧化硅微球，并将其重悬在PBS溶液中； 活化羧基化二氧化硅微球表面羧基：将羧基化的二氧化硅微球置于2ml进口离心管中，向离心管中加入N-羟基丁二酰亚胺和1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐，室温反应，活化羧基化二氧化硅微球表面的羧基，离心去除多余的活化剂，将活化后的羧基二氧化硅微球重悬在PBS溶液中； 2抗体在探针微球和捕获微球上的偶联 将活化后的粒径为1-5μm的彩色羧基化微球作为目标物的捕获微球，与目标物的捕获抗体混合后于室温孵育，得到制备好的捕获微球； 将活化后的粒径为150-200nm的白色羧基二氧化硅微球作为探针微球与检测抗体室温孵育得到制备好的探针微球； 3与目标物的反应 在离心管中将样品、捕获微球和探针微球混合，于离心管中反应3-10min，取2微升反应后的溶液，均匀涂在载玻片上，烘干后进行观察； 4显微图像的获取 将载玻片放置到显微镜下后，利用显微镜上光源，以恒定的参数直接获得图像，在显微成像时粒径为150-200nm的探针微球由于通过镜面反射光源的照射光，其本身变成了一个光源，又因感光元件过度曝光，形成比光源本身更大的光晕，在视场中形成明亮光斑，并将其作为检测信号； 5定量分析 使用图像分析软件ImageJ对获得的图像进行分析：首先对于两种不同大小的微球粒子质心坐标分别进行统计，然后计算坐标值半径相交的质心数目，由相交的质心数目得到捕获微球与探针微球通过目标物结合相交的结合位点数，结合位点数与样品中目标物浓度成正比，由此可以实现对目标物的定量检测。

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