南京市口腔医院张晓昕获国家专利权
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龙图腾网获悉南京市口腔医院申请的专利可被靶向诱导死亡的肿瘤相关成纤维细胞及其构建方法和应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN116024178B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-10发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211011013.X,技术领域涉及:C12N5/10;该发明授权可被靶向诱导死亡的肿瘤相关成纤维细胞及其构建方法和应用是由张晓昕;泥艳红;井玥;宋玉仙;王雨晗;翁佩设计研发完成,并于2022-08-23向国家知识产权局提交的专利申请。
本可被靶向诱导死亡的肿瘤相关成纤维细胞及其构建方法和应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种可被靶向诱导死亡的肿瘤相关成纤维细胞,所述肿瘤相关成纤维细胞染色体携带序列如SEQIDNo:1的多核苷酸片段,所述肿瘤相关成纤维细胞具有与其他肿瘤相关成纤维细胞相当的形态和体外生长速率。所述肿瘤相关成纤维细胞在于其他肿瘤相关成纤维细胞共培养时,可被药物特异性的诱导死亡,所述的药物为更昔洛韦,更昔洛韦药物浓度范围为1‑100μM。本发明提供了一种全新的、方便的研究不同亚型CAFs功能的细胞构建方法及其应用,该新型CAFs在更昔洛韦处理下,会靶向死亡,削弱该类型CAFs对共培养肿瘤细胞的作用,能帮助有效区分不同亚型CAFs在肿瘤发生发展中的作用。
本发明授权可被靶向诱导死亡的肿瘤相关成纤维细胞及其构建方法和应用在权利要求书中公布了:1.可被靶向诱导死亡的肿瘤相关成纤维细胞在研究不同亚型肿瘤相关成纤维细胞的功能上的应用,其特征在于,所述肿瘤相关成纤维细胞染色体携带序列如SEQIDNo:1的多核苷酸片段,其通过如下步骤构建得到:1构建由CMV启动子调控表达SEQIDNO:1多核苷酸片段的质粒:在pCDH质粒载体基础上,经XbaI和BamHI限制性内切酶切割后,将载体与包含SEQIDNO:1的多核苷酸片段连接,得到连接载体,然后转入Stbl3甘油菌中,所得克隆进行测序鉴定,获得由CMV启动子调控表达SEQIDNO:1多核苷酸片段的质粒;其中包含SEQIDNO:1的多核苷酸片段的正义链片段为序列为SEQIDNO:1多核苷酸片段的5’端添加CTAGA,3’端添加G,反义链片段为SEQIDNO:1多核苷酸片段的5’端添加GATCC,3’端添加T,获得的连接载体; 2将步骤1得到的质粒与包装质粒和转染试剂混合混合转染293T细胞,获得含由CMV启动子调控表达SEQIDNO:1多核苷酸片段质粒的慢病毒,然后以肿瘤相关成纤维细胞为出发细胞,应用慢病毒将构建的质粒转染至肿瘤相关成纤维细胞中; 3利用1μgml嘌呤霉素对步骤2获得的肿瘤相关成纤维细胞进行筛选后,荧光显微镜观察和Q-PCR鉴定; 所述肿瘤相关成纤维细胞具有与其他肿瘤相关成纤维细胞相当的形态和体外生长速率;所述肿瘤相关成纤维细胞在与其他肿瘤相关成纤维细胞共培养时,可被药物特异性的诱导死亡,所述的药物为更昔洛韦,更昔洛韦药物浓度范围为1-100μM; 在应用时,通过将所述肿瘤相关成纤维细胞与其他肿瘤细胞共培养,构建共培养肿瘤细胞增殖模型,将所述肿瘤相关成纤维细胞与肿瘤细胞共培养,混合比例按照体积比为1:0.5~2,然后用更昔洛韦处理,观察肿瘤相关成纤维细胞对共培养肿瘤细胞增殖的作用,其中,更昔洛韦药物浓度范围为1-100μM;利用更昔洛韦可诱导新的肿瘤相关成纤维细胞死亡,削弱肿瘤相关成纤维细胞对共培养肿瘤细胞迁移的作用,明确肿瘤相关成纤维细胞对共培养肿瘤细胞迁移的作用。
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