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龙图腾网获悉上海交通大学医学院申请的专利单细胞外显子测序方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115927568B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-10发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211640296.4，技术领域涉及：C12Q1/6869；该发明授权单细胞外显子测序方法及其应用是由何牮设计研发完成，并于2022-12-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本单细胞外显子测序方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种单细胞外显子测序方法及其应用，该方法包括：S1、肿瘤单细胞分选；S2、将分选的肿瘤单细胞进行MDA扩增，获得基因组文库；S3、检测MDA扩增产物均一性，选择多个位于不同染色体上的位点并设计对应的扩增引物，通过qPCR检测每颗单细胞MDA产物这多个位点的扩增效果，进而确定基因组是否扩增均一；S4、gDNA文库制备：将扩增后的DNA打断为150‑200bp的片段，通过末端修复、加尾、加接头、扩增，获得gDNA文库；S5、外显子捕获及文库构建：将制备好的gDNA文库与特定的探针进行杂交，捕获特定区域后，PCR扩增添加索引标签，获得外显子文库；S6、将外显子文库进行测序。

本发明授权单细胞外显子测序方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种非诊断目的的肿瘤单细胞外显子测序方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、肿瘤单细胞分选；包括如下步骤： 步骤1、样本准备，将待分选肿瘤细胞解离成细胞悬液； 步骤2、样品加载：启动单细胞滴定分离系统，将步骤1的肿瘤细胞悬液加到起始样品孔中，然后将孔板放置到收集位置； 步骤3、设置单细胞滴定分选参数，调整滴定位置至孔板底部中心位置； 步骤4、单细胞滴定分选：用毛细管吸取细胞，利用成像系统观察液滴状态，对液流中通过的细胞进行观察，通过调整获得样品中细胞的各个参数，调整分选的细胞粒径，以捕获活性细胞，并最终形成450-600pL体积的液滴，滴定至孔板的每个孔中，每孔1个细胞并根据留存的喷嘴区单个细胞的照片剔除空孔、多细胞孔；获得单细胞； S2、将分选的肿瘤单细胞进行MDA扩增，获得基因组文库； S3、检测MDA扩增产物均一性，选择多个位于不同染色体上的位点并设计对应的扩增引物，通过qPCR检测每颗单细胞MDA产物这多个位点的扩增效果，进而确定基因组是否扩增均一； S4、gDNA文库制备：将扩增后的DNA打断为150-200bp的片段，通过末端修复、加尾、加接头、扩增，获得gDNA文库； S5、外显子捕获及文库构建：将制备好的gDNA文库与特定的探针进行杂交，捕获特定区域后，PCR扩增添加索引标签，获得外显子文库； S6、将外显子文库进行测序； 步骤S3具体为： 选择多个位于不同染色体上的位点并设计对应的扩增引物，通过qPCR检测每颗单细胞MDA产物多个位点的扩增效果，进而确定基因组是否扩增均一，其中阳性对照为肿瘤组织来源提取的gDNA，阴性对照为无酶水； 相对均一性值RelativeuniformityvalueRUV，计算公式如下： RelativeuniformityvalueRUV=2-Cti-Ct0 其中，Cti表示样本i中该位点的Ct值，Ct0表示未扩增基因组DNA中同一位点的Ct值；未扩增的基因组DNA的RUV应该是1；RUV接近于1表示该位点的扩增比较均匀；多个位于不同染色体上的位点中，至少75%个位点的RUV值在0.25-4之间的单细胞MDA产物方可视为符合条件进行下一步外显子文库构建的样品； S3中，所述扩增引物包括以下引物对中的多对：

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