北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司王壮获国家专利权
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龙图腾网获悉北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司申请的专利一种牙髓干细胞的制备方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120866207B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511025385.1,技术领域涉及:C12N5/0775;该发明授权一种牙髓干细胞的制备方法及应用是由王壮设计研发完成,并于2025-07-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种牙髓干细胞的制备方法及应用在说明书摘要公布了:本发明提出了一种牙髓干细胞的制备方法及应用,属于医药技术领域。向表面处理的玻璃培养皿中加入含有络合剂、促生长因子和天然抗菌剂的α‑MEM基础培养液,加入清洗、剪碎后的新鲜人牙髓组织,恒温培养,原代细胞爬出后,倾倒出液体,收集原代细胞,部分重悬于细胞冻存液中,冻存,将剩余部分原代细胞加入含有纳米激活粒子的培养基中,低氧、低频磁场、光照条件下,传代培养,收集传代细胞,重悬于细胞冻存液中,冻存,制得牙髓干细胞。本发明制备方法简单,成本较低,且易于实现工业化应用,培养周期短,培养获得的牙髓干细胞生存能力强,分化性好,能够分化为成骨细胞,为制备治疗牙体缺损、牙齿缺失的药物奠定了基础。
本发明授权一种牙髓干细胞的制备方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种牙髓干细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: S1.玻璃培养皿的表面处理:将玻璃培养皿中盛放碱液,加热处理,倒出碱液,然后加入Tris-HCl溶液,加入聚多巴胺,加热搅拌反应,倾倒出溶液,然后加入去离子水、羟基磷灰石和胶原蛋白肽,加入NHS和EDC,超声处理,搅拌反应,倾倒出液体,洗涤,干燥,制得表面处理的玻璃培养皿; S2.初级培养液的制备:向α-MEM基础培养液中加入络合剂、促生长因子和天然抗菌剂,搅拌混合均匀,制得初级培养液;所述α-MEM基础培养液、络合剂、促生长因子和天然抗菌剂的质量比为150-200:1:0.3-0.5:1-2,所述络合剂选自柠檬酸、柠檬酸钠、EDTA二钠、EDTA、植酸中的至少一种,所述促生长因子包括肝素钠和白细胞介素转化生长因子-β,质量比为2-3:0.2-0.5,所述天然抗菌剂包括阿魏酸和大蒜素,质量比为2-3:5-7; S3.细胞冻存液的制备:向DMEM培养基中加入甘露糖、DMSO、谷胱甘肽、牛血清白蛋白,混合均匀制得细胞冻存液; S4.培养:将初级培养液加入表面处理的玻璃培养皿中,加入清洗、剪碎后的新鲜人牙髓组织,恒温培养,原代细胞爬出后,倾倒出液体,收集原代细胞,部分重悬于细胞冻存液中,冻存; S5.传代培养:将剩余部分原代细胞加入含有纳米激活粒子的培养基中,低氧、低频磁场、光照条件下,传代培养,收集传代细胞,重悬于细胞冻存液中,冻存,制得牙髓干细胞; 所述纳米激活粒子的制备方法如下: T1.将块状黑磷加入N-甲基吡咯烷酮中,避光冰浴超声,离心,洗涤,干燥,产物加入Tris-HCl溶液中,加入盐酸多巴胺,加热搅拌反应,离心,洗涤,干燥,制得改性黑磷纳米片; T2.将改性黑磷纳米片、钼酸钠加入水中,调节溶液pH值,加入谷胱甘肽,混合搅拌,水热反应,冷却,离心,洗涤,干燥,制得掺杂N的MoS2量子点@改性黑磷纳米片; T3.将掺杂N的MoS2量子点@改性黑磷纳米片加入水中,惰性气体保护下,加入氯化铁和氯化亚铁,滴加氨水,加热搅拌反应,离心,洗涤,干燥,制得纳米激活粒子。
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