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龙图腾网获悉山东大学第二医院申请的专利一种基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120272537B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510748979.9，技术领域涉及：C12N15/87；该发明授权一种基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒及其制备方法和应用是由裴国静;唐东起;张文;梁延杰;康梦茹设计研发完成，并于2025-06-06向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒及其制备方法和应用，涉及生物医药技术领域，包括以聚β‑氨基酯阳离子聚合物作为基因递送载体，在所述基因递送载体上包含微管相关序列MTAS和核定位信号NLS短肽，所述基因递送载体与携带目标基因的质粒DNA混合制备成纳米颗粒，所述携带目标基因的质粒DNA采用微流控混合工艺均匀分散于纳米颗粒中；本发明的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒结构设计巧妙，采用微流控混合工艺提高了纳米载体与质粒DNA混合的均一性，透析条件的优化进一步提高了纳米颗粒的性能，降低了潜在的细胞毒性和不良影响，在转导非激活T细胞后能够产生强大的肿瘤杀伤能力和细胞因子分泌。

本发明授权一种基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.一种基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒，其特征在于：以聚β-氨基酯阳离子聚合物作为基因递送载体，在所述基因递送载体上包含微管相关序列MTAS和核定位信号NLS短肽，所述基因递送载体与携带目标基因的质粒DNA混合制备成纳米颗粒，所述携带目标基因的质粒DNA采用微流控混合工艺均匀分散于纳米颗粒中，所述目标基因为CAR基因； 所述基于微流控技术的核靶向肽修饰DNA纳米颗粒通过以下步骤制备得到： ①制备聚β-氨基酯阳离子聚合物作为基因递送载体： 将1,4-丁二醇二丙烯酸酯和4-氨基-1-丁醇经过迈克尔加成反应合成丙烯酸酯封端的聚合物，然后与1-3-氨丙基-4-甲基哌嗪反应得到聚β-氨基酯，将所得聚β-氨基酯溶解于DMSO中，得到PBAE-447溶液，-20℃下保存备用； ②在PBAE-447聚合物上加入包含微管相关序列MTAS和核定位信号NLS短肽： 将交联剂N-p-马来酰亚胺基苯基异氰酸酯溶解在DMSO中，添加到步骤①所得PBAE-447溶液中，在20~35℃下反应3h，得到活化后的PBAE-447-马来酰亚胺衍生物，将所得活化后的PBAE-447-马来酰亚胺衍生物与微管相关序列MTAS和核定位信号NLS短肽混合反应3h后，得到混合溶液，所得混合溶液经过滤、真空干燥得到偶联后PBAE-447-MTAS-NLS；将所得偶联后PBAE-447-NLS-MTAS溶解在DMSO中，-20℃保存备用； ③准备质粒DNA：使用两个质粒，质粒1表达PiggyBac转座酶；质粒2由hPGK启动子驱动目标基因的表达； 质粒2的构建方法：由hPGK连接目的基因，然后插入到PiggyBac-CMV-MCS-Fluc-EF1a-copGFP-T2A-Puro质粒的EcoRINotI处得到； ④肽修饰DNA纳米颗粒的制备： 溶解于DMSO中的偶联后的PBAE-447-NLS-MTAS经有机溶剂稀释后作为有机相；质粒1和质粒2混合得到质粒DNA，将质粒DNA溶解于pH=5.0的NaAcHAc缓冲液中作为酸性水相，将所得有机相和酸性水相经微流控装置混合，透析除去多余试剂，得到核靶向肽修饰DNA纳米颗粒； 所得有机相和酸性水相经微流控装置混合时PBAE-447-NLS-MTAS与质粒2的质量比为60：1；质粒1和质粒2按质量比1：3混合； 透析时先在pH=10的氨水中透析1h，然后在PBS中透析1h，透析温度控制在4-8℃； 所述有机溶剂由乙醇和DMSO按照体积比1：1混合得到。

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