南京工业大学李莎获国家专利权
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龙图腾网获悉南京工业大学申请的专利一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116042502B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202310168298.6，技术领域涉及：C12N1/21；该发明授权一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用是由李莎;王鑫沂;薛瑞;徐虹;王瑞;邱益彬设计研发完成，并于2023-02-27向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过信号肽筛选，将信号肽与贻贝蛋白的基因进行连接并转入质粒pET‑Duet进行融合表达。进一步的，本发明将角质酶Tfu‑0883基因转入质粒pET‑Duet，与信号肽‑贻贝蛋白融合蛋白进行共表达，最终实现贻贝蛋白的胞外分泌。此外本发明通过添加表面活性剂的方式优化了发酵培养基，从而提高胞外分泌水平。纯化后的发酵液中的贻贝蛋白产量可达20‑40mgL。本发明实现了在大肠杆菌中胞外分泌具有生物活性的可溶性贻贝蛋白，减弱了产物积累造成的细胞毒性作用，促进了贻贝蛋白的持续合成，并且避免了后续破碎细胞操作，优化了工艺。
本发明授权一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌及其构建方法与应用在权利要求书中公布了：1.一种胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌，其特征在于，以E.coliBL21DE3为表达宿主，在表达载体上依次插入信号肽基因，贻贝蛋白基因和角质酶基因，其中信号肽基因与贻贝蛋白基因进行融合表达后，再与角质酶基因共表达； 其中，所述信号肽为Bla，其核酸序列如SEQIDNO.3所示；所述贻贝蛋白为Mgfp-5，其核酸序列如SEQIDNO.1所示；所述角质酶为角质酶Tfu-0883其核酸序列如SEQIDNO.15所示； 其中，所述胞外分泌贻贝蛋白的基因工程菌在发酵制备贻贝蛋白过程中添加表面活性剂Trition-X100。
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