青岛科技大学张永勤获国家专利权
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龙图腾网获悉青岛科技大学申请的专利一种测定α-淀粉酶活力的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115901649B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211417997.1,技术领域涉及:G01N21/31;该发明授权一种测定α-淀粉酶活力的方法是由张永勤;吕兴霜;陈相玉;邬雅喃;郑继鹏;沈悦聪;邢明霞;许文廷;刘银春;董静文;刘建瑞;刘芳;刘展祥设计研发完成,并于2022-11-14向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种测定α-淀粉酶活力的方法在说明书摘要公布了:本发明属于酶活力测定技术领域,针对现有的淀粉酶活力测定技术存在的灵敏度低、不符合化学计量性、底物溶解性差、标准曲线截距偏离原点的问题,本发明提供一种α‑淀粉酶活力的测定方法,以淀粉或羟丙基淀粉为底物配制底物溶液,取用底物溶液为溶剂配制的不同浓度的葡萄糖标准溶液,在碱性条件下加入新鲜配制的MBTH试剂,加入硫酸铁铵试剂,进行显色反应,测定吸光度值,根据每组葡萄糖浓度与测得的吸光度值之间的关系绘制标准对应关系曲线;取用底物溶液,加入淀粉酶,进行酶解反应,并测定吸光度值;计算淀粉酶活力。与现有技术的MBTH法相比该方法更灵敏、更准确,显色产物更加稳定。
本发明授权一种测定α-淀粉酶活力的方法在权利要求书中公布了:1.一种测定α-淀粉酶活力的方法,其特征在于,包括以下步骤: 1配制底物溶液和α-淀粉酶溶液:将淀粉或羟丙基淀粉分散到强碱溶液中,充分混匀直至底物溶解,然后加入酸对强碱进行中和,并调整pH至待测pH,再用待测pH的缓冲溶液定容;所述的待测pH为测定α-淀粉酶活力的pH值;所述的羟丙基淀粉的摩尔取代度为0.05-0.5; 用同一所述缓冲溶液配制α-淀粉酶溶液; 2绘制葡萄糖吸光度值与葡萄糖浓度的标准对应关系曲线: a.用步骤1配制的底物溶液,配制一系列浓度梯度的葡萄糖标准溶液,所述一系列葡萄糖标准溶液中的底物的浓度相同,并且葡萄糖浓度范围在0-0.3mmolL; b.向所述一系列浓度梯度的葡萄糖标准溶液中加入碱性试剂得到碱性葡萄糖标准溶液,所述碱性葡萄糖标准溶液中的碱性试剂的浓度相同,然后加入新鲜配制的MBTH试剂,体系中OH-浓度为0.01-0.2molL,MBTH的浓度范围为0.3-4.5mmolL,在50-90℃条件下反应5-180min,再加入酸性铁试剂,体系中H+浓度为0.02-0.3molL,Fe3+的初始浓度范围为1-6mmolL,反生显色反应,显色稳定后在580-680nm波长下测定吸光度值,根据每组葡萄糖浓度与测得的吸光度值之间的关系绘制标准对应关系曲线; 所述的MBTH试剂是只由MBTH配制而成的水溶液;所述酸性铁试剂是由可溶性Fe3+盐和强酸配制而成的水溶液; 3α-淀粉酶的酶解反应:向α-淀粉酶溶液中加入步骤1配制的底物溶液,保证所得溶液中底物的浓度与步骤2葡萄糖标准溶液中底物的浓度相同,然后进行酶解反应,再加入碱性试剂,终止酶解反应,得到碱性酶解液,所述碱性酶解液中碱性试剂的浓度与步骤2碱性葡萄糖标准溶液中碱性试剂的浓度相同; 4制备碱性酶解空白溶液; 5测定碱性酶解液和碱性酶解空白溶液:根据步骤2的方法进行MBTH反应,测定碱性酶解液和碱性酶解空白溶液,从而获得酶解产生的还原端基的浓度,进而得到α-淀粉酶活力。
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