上海药明生基医药科技有限公司雷静获国家专利权
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龙图腾网获悉上海药明生基医药科技有限公司申请的专利一种检测重组慢病毒宿主细胞DNA残留片段分布的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115261488B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210953048.9,技术领域涉及:C12Q1/6888;该发明授权一种检测重组慢病毒宿主细胞DNA残留片段分布的方法是由雷静;王沁瑜;欧国娟;林诗曼;蒋鑫;周园;程志茹;徐刚明;郑艳军;陈琪设计研发完成,并于2022-08-10向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种检测重组慢病毒宿主细胞DNA残留片段分布的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种检测重组慢病毒宿主细胞DNA残留片段分布的方法,所述方法使用实时荧光定量PCR准确检测重组慢病毒样品中HEK293T宿主细胞DNA残留在122bp,244bp和562bp三个片段长度分布。本发明方法采用新型prepGEM酶裂解rLVV病毒,5~15分钟内裂解病毒,2~10分钟内使酶失活,需要病毒样品量少,病毒裂解液可以直接应用于实时荧光定量PCR反应。与磁珠法相比,prepGEM酶裂解法数据更为稳定和合理,方差和CV均更小。
本发明授权一种检测重组慢病毒宿主细胞DNA残留片段分布的方法在权利要求书中公布了:1.一种检测重组慢病毒宿主细胞DNA残留片段分布的方法,其特征在于,所述宿主细胞为HEK293T细胞,所述方法包括以下步骤: 1在5~50μL含有HEK293T宿主细胞的rLVV病毒样品中加入5~10μL的10X缓冲液和1~5μL的prepGEM酶,然后加入无核酸酶水至总体积为50~100μL,轻轻吹打,混合均匀,将混合物置于75℃孵育5~15分钟,使prepGEM酶裂解病毒,然后将混合物置于95℃,孵育2~10分钟,使酶失活; 2检测rLVV病毒样品的HEK293T宿主细胞DNA残留片段分布:取5~10μL病毒裂解液样品,根据宿主细胞DNA残留的含量,不稀释或稀释合适倍数,加入15~17μL的2XPCRSupermix和2~5μL的引物探针混合物,所述引物探针混合物为商业化试剂盒湖州申科Cat.No.SK030306S-H中的组分,然后再加入无核酸酶水使PCR反应体系体积为30μL;将PCR反应体系转移入96孔板中,封膜96孔板,轻轻离心30秒,使液滴沉降到96孔板孔底,将96孔板放放置入实时荧光定量PCR仪进行PCR扩增,实时荧光定量PCR反应完成后,分析rLVV病毒样品的HEK293T宿主细胞DNA残留的片段分布。
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