广西大学刘继栋获国家专利权
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龙图腾网获悉广西大学申请的专利一种大肠杆菌利用D-葡萄糖/甘油复合碳源体系同步合成D-阿洛酮糖的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120905332B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511449079.0,技术领域涉及:C12P19/02;该发明授权一种大肠杆菌利用D-葡萄糖/甘油复合碳源体系同步合成D-阿洛酮糖的方法是由刘继栋;谢电东;吕菁;涂一帆设计研发完成,并于2025-10-11向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种大肠杆菌利用D-葡萄糖/甘油复合碳源体系同步合成D-阿洛酮糖的方法在说明书摘要公布了:本发明的一种大肠杆菌利用D‑葡萄糖甘油复合碳源体系同步合成D‑阿洛酮糖的方法,属于合成生物技术领域,解决生产D‑阿洛酮糖时产率低的问题。该方法在大肠杆菌上过表达pgi基因和glk基因,结合alse基因以及a6pp基因后,部分敲除pfkA基因,过表达Mlc基因和glpkG913SG913S基因,构建可利用甘油生长的重组大肠杆菌;再引入aldO基因,并利用rhaD基因和yqaB基因构建以甘油为底物合成D‑阿洛酮糖的代谢途径,进而实现以D‑葡萄糖甘油复合碳源体系同步合成D‑阿洛酮糖。本发明率先提出基于整合羟醛反应与糖酵解途径的D‑阿洛酮糖合成策略,实现甘油、D‑葡萄糖共利用,为工业化生产提供新策略。
本发明授权一种大肠杆菌利用D-葡萄糖/甘油复合碳源体系同步合成D-阿洛酮糖的方法在权利要求书中公布了:1.一种大肠杆菌利用D-葡萄糖甘油复合碳源体系同步合成D-阿洛酮糖的方法,其特征在于:以D-葡萄糖甘油为底物,通过重组大肠杆菌发酵制得;所述重组大肠杆菌为重组大肠杆菌Ec02和或重组大肠杆菌Ec03; 所述重组大肠杆菌Ec02在E.coliBL21DE3的基础上,过表达pgi基因、glk基因、alse基因和a6pp基因,并过表达Mlc基因和glpkG913S基因,敲除pfkA基因; 所述重组大肠杆菌Ec03在E.coliBL21DE3的基础上,过表达pgi基因、glk基因、alse基因、a6pp基因、并过表达Mlc基因和glpkG913S基因,敲除pfkA基因,同时过表达aldO基因、rhaD基因和yqaB基因; 所述重组大肠杆菌Ec02、重组大肠杆菌Ec03的培养条件为:挑取单菌落接种至LB液体培养基中,振荡培养至对数生长期; 所述重组大肠杆菌Ec02、重组大肠杆菌Ec03的发酵条件为:按1%vv接种量转接至发酵液中;pH7.0,至OD600达0.4以上时加入IPTG作为诱导剂,IPTG浓度0.1-0.5mM;随后调整培养温度至30℃,发酵时间为12~72h; 所述重组大肠杆菌Ec02、重组大肠杆菌Ec03的初始OD600为0.3~1.1; D-葡萄糖和甘油浓度比为9~1:1~9; 所述重组大肠杆菌Ec02对应的复合碳源为D-葡萄糖和甘油,其中,D-葡萄糖5gL、甘油4gL; 所述重组大肠杆菌Ec03对应的复合碳源为D-葡萄糖和甘油,其中,复合碳源为20~50gL; 所述重组大肠杆菌Ec02的构建方法如下: 以大肠杆菌E.coliBL21DE3为底盘宿主菌,过表达pgi基因、glk基因、alse基因、a6pp基因,敲除pfkA基因得重组大肠杆菌Ec01; 将Mlc基因、glpKG913S基因连接在载体pRSFDuet-1上,得到重组质粒pRSFDuet-Mlc-glpKG913S;将重组质粒pRSFDuet-Mlc-glpKG913S转化至重组大肠杆菌Ec01中,得到重组大肠杆菌Ec02; 所述Ec03的构建方法如下: 将aldO基因、rhaD基因、yqaB基因连接在载体PACYCDuet-1上,得到重组质粒PACYCDuet-aldO-rhaD-yqaB;将重组质粒PACYCDuet-aldO-rhaD-yqaB转化至重组大肠杆菌Ec02,得到重组大肠杆菌Ec03。
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