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龙图腾网获悉广东众合天诚生物科技有限公司申请的专利一种诱导性NK细胞的培养方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120082512B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-03发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510293885.7，技术领域涉及：C12N5/0783；该发明授权一种诱导性NK细胞的培养方法是由兰雪设计研发完成，并于2025-03-13向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种诱导性NK细胞的培养方法在说明书摘要公布了：本发明公开了NK领域的一种诱导性NK细胞的培养方法，本发明通过外周血单个核细胞开始分离，建立诱导培养体系和共培养体系，使用天然植物提取物和乳杆菌制备的诱导培养液，为细胞提供了具有生物活性的成分，能够有效促进细胞的生长、分化或诱导特定的免疫反应，通过将人肾母细胞瘤细胞与外周血单个核细胞共培养，能够模拟体内的细胞互作环境，研究细胞间的相互作用或细胞与诱导培养液的响应。

本发明授权一种诱导性NK细胞的培养方法在权利要求书中公布了：1.一种诱导性NK细胞的培养方法，其特征在于：具体包括以下步骤： S1：外周血单个核细胞的分离；取健康肘静脉外周血，吸取上层血浆层，置于离心管中，密封后，置于水浴锅中灭活分离细胞和血浆，静置、离心，取下层血浆加入生理盐水，得到血细胞悬液，向血细胞悬液注入淋巴细胞分离液，离心，收集单个核细胞层，加入生理盐水，离心、洗涤后，加入培养基制成细胞悬液，备用； S11、取健康肘静脉外周血，加入肝素钠进行抗凝处理，将全血体系置于室温下离心，700-800g下离心10min后，设置降速1，分离细胞和血浆，上层为血浆层，下层为血细胞层，吸取上层血浆层，置于离心管中，密封后，置于水浴锅中灭活； S12、灭活后，置于4℃中静置30min后，室温条件下按照900-1000g离心10min，升8降5，取上层血浆转移至新的离心管中，置于4℃下进行保存，得到自体血清；下层血浆中注入0.9%生理盐水，混合均匀后，得到血细胞悬液； S13、取步骤S12所述的血细胞悬液注入10-20mL的淋巴细胞分离液中，室温下，700-800离心20min，升2降1，吸取单个核细胞层至新离心管中，加入0.9%生理盐水，混合均匀后，室温条件下700-800g下离心10min，升9降9，弃上清后，加入补充0.9%生理盐水进行重悬，重复离心步骤后，弃上清，加入RPMI-1650培养基制成细胞悬液，置于4℃下进行保存、备用； S2：诱导培养液的制备；取黄芪、杜仲提取复合多糖，将甜菜榨汁后，与复合多糖混合，取植物乳杆菌进行发酵，收集发酵液，离心、灭菌后，得到诱导培养液，备用； S21、将黄芪、杜仲分别进行粉碎处理后得到黄芪粉末和杜仲粉末，将黄芪粉末和杜仲粉末混合后，加入圆底烧瓶中，加入纯化水，升高温度至70-100℃，进行水浴加热回流反应，反应1-4h后，抽滤，收集滤液，浓缩至原体积的13后，加入乙醇溶液进行醇沉，静置过夜后，过滤，收集沉淀，得到复合多糖； S22、取甜菜进行清洗后，去皮、切块，置于低速榨汁机中，按照50-80rpm速度进行榨汁处理，过滤后，收集滤液，得到甜菜汁； S23、将植物乳杆菌进行活化，涂布与MRS琼脂平板上，挑取单菌落置于MRS肉汤培养基中，在37℃下孵育24h后，得到菌液，活菌浓度为1.0×108-5.0×108CFUmL； S24、将步骤S22所制备的甜菜汁和步骤S21所制备的复合多糖进行混合，按照体积分数1%-5%加入步骤S23所制备的菌液，置于33-38℃下，发酵18-36h后，将发酵液在4℃下，按照6000-8000rpm速度离心5min后，升高温度至90℃下灭菌处理0.5-1h后，冷却，在4℃下保存备用，得到诱导培养液； S3：细胞培养：采用人肾母肿瘤细胞和步骤S1所制备的细胞悬液进行共培养，加入步骤S2所制备的诱导培养液进行诱导； S31、将人肾母细胞瘤细胞株在15%FBS和1%PS的McCoy's5A培养基中进行培养，在37℃、5%CO2条件下的培养箱中性培养，待细胞密度达到70%-90%时，加入含有0.25%EDTA胰蛋白酶消化液进行消化，消化后进行传代培养； S32、将步骤S1中分离得到的外周血单个核细胞使用含有10%FBS的PRMI-1640稀释至1.0×106个mL，按照每孔1.0×103-2.0×103个孔，将外周血单个核细胞转移共培养小室中； S33、将人肾母细胞瘤细胞按照1.0×103-2.0×103个孔接种于6孔板中，向孔内放入悬挂共培养小室，置于37℃、5%CO2环境下培养，向共培养小室内按照每孔100μL加入步骤S2所制备的诱导培养液、并按照每孔15μL加入CD16抗体，共培养24h。

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