江苏硕世生物科技股份有限公司聂自豪获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏硕世生物科技股份有限公司申请的专利一种去除人源核酸的测序文库构建方法及应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119753090B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510004006.4,技术领域涉及:C12Q1/6806;该发明授权一种去除人源核酸的测序文库构建方法及应用是由聂自豪;张蓉;张乐;王瑶;姚继成;陈永红;郭玉婉;周国辉;刘中华;王国强设计研发完成,并于2025-01-02向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种去除人源核酸的测序文库构建方法及应用在说明书摘要公布了:本发明公开了一种去除人源核酸的测序文库及其构建方法和应用,构建方法包括:将核酸片段化和加测序接头,构建DNA或RNA文库,或者RNA与DNA共建文库,然后以加完测序接头的文库为模板,将文库与特异性人源杂交探针进行变性退火,再用DSN酶进行消化,复性过程中人源核酸含量较高优先与人源杂交探针退火形成双链,被DSN酶降解,病原微生物含量低复性慢仍保持单链状态无法被DSN酶消化,人源核酸被有效去除,而病原微生物核酸通过后续PCR进一步富集。本发明方法可有效降低文库中的人源核酸比例,并最大化保留病原微生物的核酸信息。
本发明授权一种去除人源核酸的测序文库构建方法及应用在权利要求书中公布了:1.一种去除人源核酸的测序文库构建方法,其特征在于,包括以下步骤: S1、文库制备:将核酸片段化和加测序接头,根据核酸类型分为DNA文库、RNA文库、RNA与DNA共建文库; S2、人源核酸杂交:将人源杂交探针加入到步骤S1构建的文库中,进行变性退火处理,使人源探针特异性地结合到人源序列文库上; S3、热稳定性双链特异性核酸酶消化:在保持退火温度不变的条件下加入热稳定性双链特异性核酸酶进行消化,待消化完成后加入终止液终止反应;所述终止液为SDS溶液或EDTA溶液; S4、消化后产物扩增:将步骤S3热稳定性双链特异性核酸酶消化后的产物用文库通用引物进行PCR扩增,进行文库富集,得到去除人源核酸的测序文库;所述PCR扩增以S3热稳定性双链特异性核酸酶消化后的产物为模板,所述文库通用引物为测序接头通用序列,基于不同测序平台选择配套的测序接头和文库通用引物; S2中,所述人源杂交探针的制备方法,包括以下步骤: A、RNA提取:提取Hela细胞的总RNA; B、RNA片段化:取适量的总RNA与片段化缓冲液混合,在一定的反应条件下,将RNA打断成100-150bp左右的片段; C、逆转录反应:以片段化后的RNA为底物,与逆转录反应缓冲液及逆转录酶混合,进行逆转录反应,合成cDNA,实现从RNA到cDNA的转换; D、RNA消化制备单链cDNA:将cDNA产物与消化反应缓冲液及RNaseH酶混合,进行反应,回收,制备单链cDNA; E、人源杂交探针制备:将HumanCot-1DNA与步骤D制备的单链cDNA等质量混合,制成能够特异性结合不同类型人源核酸序列的探针混合液,完成人源杂交探针的制备; 步骤S1中的DNA文库的制备采用物理法打断、片段化酶法打断或Tn5转座酶法打断进行DNA片段化,再进行末端修复加A,然后连接测序接头; 步骤S1中的RNA文库的制备通过在二价金属离子缓冲液中热裂解片段化RNA,再进行逆转录和二链合成,然后进行末端修复加A,连接测序接头; 步骤S1中的RNA与DNA共建文库的制备采用将RNA进行逆转录和二链合成,再和DNA一起进行片段化酶法打断,然后进行末端修复加A,再连接测序接头。
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