吉林农业大学曾艳获国家专利权
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龙图腾网获悉吉林农业大学申请的专利一种抗猪流行性腹泻的中药发酵液及其制备方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119733043B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411934411.8,技术领域涉及:A61K39/215;该发明授权一种抗猪流行性腹泻的中药发酵液及其制备方法是由曾艳;曹欣;战佳兴;王海旭;鲁逸远;蒲飞洋;赵翊博;包宏宇;崔童;梁田浩;陈嘉乐;王春凤设计研发完成,并于2024-12-26向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种抗猪流行性腹泻的中药发酵液及其制备方法在说明书摘要公布了:本发明属于生物医药领域,具体涉及一种抗猪流行性腹泻的中药发酵液及其制备方法。本发明通过对不同药物的筛选,确定了穿心莲对猪流行性腹泻的治疗效果与安全性,进而在穿心莲药液的基础上结合重组植物乳杆菌进行发酵,从而得到具有抗猪流行性腹泻效果的中药发酵液。仔猪实验显示,中药发酵液可促进免疫细胞活化、提高抗体水平、降低病毒载量、减轻肠道损伤,为防控提供综合有效方案。
本发明授权一种抗猪流行性腹泻的中药发酵液及其制备方法在权利要求书中公布了:1.一种中药发酵液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 1中药液制备:将穿心莲洗净研磨成粉,加8倍体积蒸馏水浸泡2h后煮沸,经纱布过滤、4000rpm离心15min取上清液,再将上清液浓缩至1gmL,最后115℃高压灭菌25min,于超净台用1.5EP管分装后置于-20℃冰箱保存; 2接菌发酵:将上述中药液配置成中药发酵MRS培养基,高压灭菌后将重组植物乳杆菌WCFS-PEDV-S1接种到中药发酵培养基中,发酵,获得中药发酵液; 所述重组植物乳杆菌WCFS-PEDV-S1的构建方法如下: 1质粒改造:在PHSP02标准质粒的0537位置插入EGFP片段和实验室构建的S层锚定表达系统,得到改造质粒PHSP02-EGFP; 2质粒修饰:将改造质粒PHSP02-EGFP的EGFP部分替换成PEDVljx毒株的S1蛋白,得到改造质粒PHSP02-PEDV-S1; 3感受态细胞构建:将辅助质粒PLH01转入植物乳杆菌WCFS1感受态中,获得阳性菌株PW01; 4阳性菌株筛选:改造质粒PHSP02-EGFP和PHSP02-PEDV-S1转入PW01感受态中,提取基因组,pcr筛选出阳性菌株; 5阳性菌株验证:将得到的阳性菌株传10,15,20代,提基因组PCR,证明可以稳定遗传,制作菌液涂片,在电镜下观察到绿色荧光,可认为该新型重组植物乳杆菌能够自主表达目的蛋白; 6PEDV-S1蛋白表达验证:通过Westernblot验证,利用原核表达提取的PEDV-S1蛋白作为一抗,山羊抗兔作为二抗进行孵育,认定PEDV-S1蛋白的表达。
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