南京合谷生命生物科技有限公司请求不公布姓名获国家专利权
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龙图腾网获悉南京合谷生命生物科技有限公司申请的专利一种高产观蓝的工程菌及其构建方法与应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119639641B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-02-03发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411825102.7,技术领域涉及:C12N1/21;该发明授权一种高产观蓝的工程菌及其构建方法与应用是由请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名;请求不公布姓名设计研发完成,并于2024-12-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种高产观蓝的工程菌及其构建方法与应用在说明书摘要公布了:本申请涉及一种高产观蓝的工程菌及其构建方法与应用,属于生物法合成天然染料技术领域。本申请的高产观蓝的工程菌表达icd、bpsA、glnAY405FY405F和gdhA;所述工程菌敲除acnR、yggB、glsK、aceA和ldh。本申请通过敲除yggB和aceA基因,将对glnA基因进行定点突变Y405F并将glsK基因替换为glnAY405FY405F基因,将acnR基因替换为icd基因,将ldh基因替换为gdhA基因,整合bpsA基因,能够阻断观蓝合成过程中乳酸盐、琥珀酸等副产物的形成,提升了柠檬酸→异柠檬酸→α‑酮戊二酸→谷氨酸→谷氨酰胺通路的流向,进而提高了细胞内谷氨酰胺的浓度,从而提高观蓝的产量。
本发明授权一种高产观蓝的工程菌及其构建方法与应用在权利要求书中公布了:1.一种高产观蓝的工程菌,其特征在于,所述工程菌表达异柠檬酸脱氢酶icd、蓝色素合成酶bpsA、谷氨酰胺合成酶glnAY405F和谷氨酸脱氢酶gdhA; 所述工程菌敲除乌头酸酶抑制因子acnR、谷氨酸机械敏感通道yggB、谷氨酰胺酶glsK、异柠檬酸裂解酶aceA和乳酸脱氢酶ldh; 所述高产观蓝的工程菌主要由以下步骤制备得到: A1、将谷氨酸棒状杆菌中的谷氨酰胺酶glsK敲除,回补谷氨酰胺合成酶glnAY405F至glsK位点上,得到工程菌Ⅰ; A2、将步骤A1所得工程菌Ⅰ中的乳酸脱氢酶ldh敲除,回补谷氨酸脱氢酶gdhA至ldh位点上,得到工程菌Ⅱ; A3、将步骤A2所得工程菌Ⅱ中的乌头酸酶抑制因子acnR敲除,回补异柠檬酸脱氢酶icd至acnR位点上,得到工程菌Ⅲ; A4、将步骤A3所得工程菌Ⅲ中的谷氨酸机械敏感通道yggB敲除,得到工程菌Ⅳ; A5、将步骤A4所得工程菌Ⅳ中的异柠檬酸裂解酶aceA编码基因敲除,得到工程菌Ⅴ; A6、将带有蓝色素合成酶bpsA的编码基因的质粒转入步骤A5所得工程菌Ⅴ中,得到工程菌Ⅵ,所得工程菌Ⅵ为高产观蓝的工程菌;所述带有蓝色素合成酶bpsA的编码基因的质粒中还带有p1929启动子,所述p1929启动子的序列如SEQIDNO.5所示; 所述异柠檬酸脱氢酶icd来源于谷氨酸棒状杆菌;所述异柠檬酸脱氢酶icd的编码序列如SEQIDNO.1所示; 所述谷氨酰胺合成酶glnAY405F由含有突变位点的谷氨酰胺合成酶glnA编码得到,所述谷氨酰胺合成酶glnAY405F的编码序列如SEQNO.2所示; 所述谷氨酸脱氢酶gdhA来源于谷氨酸棒状杆菌;所述谷氨酸脱氢酶gdhA的编码序列如SEQIDNO.3所示; 所述蓝色素合成酶bpsA来源于淡紫灰链霉菌Streptomyceslavendulae;所述蓝色素合成酶bpsA的编码序列如SEQIDNO.4所示。
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