中国科学院苏州生物医学工程技术研究所张威获国家专利权
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龙图腾网获悉中国科学院苏州生物医学工程技术研究所申请的专利数字化单分子酶多活性特征跨尺度异质性动态评估方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN121022993B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-27发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511569503.5,技术领域涉及:C12Q1/6858;该发明授权数字化单分子酶多活性特征跨尺度异质性动态评估方法是由张威;郑安然;周连群;李超;郭振;李金泽;李传宇;姚佳设计研发完成,并于2025-10-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本数字化单分子酶多活性特征跨尺度异质性动态评估方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种数字化单分子酶多活性特征跨尺度异质性动态评估方法,包括:将预结合完成的酶‑模板‑引物三元复合物稀释至单分子水平以载入微孔阵列芯片中的反应腔室进行滚环扩增,并利用分子信标与扩增产物结合释放荧光信号;实时监测并获取所述荧光信号以生成时间分辨的荧光强度曲线;提取所述荧光强度曲线的斜率参数以通过转换计算得到催化合成速率用于评估酶活性;利用n重高斯混合模型拟合催化合成速率值分布以获得用于评估群体均一性的标准差和用于评估稳定性的变异系数。本发明能够同时实现单分子分辨率、多参数动态关联及环境干扰处理的跨尺度分析,并通过整合单分子荧光追踪与群体统计,突破了传统分析技术的分辨率限制。
本发明授权数字化单分子酶多活性特征跨尺度异质性动态评估方法在权利要求书中公布了:1.一种数字化单分子酶多活性特征跨尺度异质性动态评估方法,其特征在于,包括: 将预结合完成的酶-模板-引物三元复合物稀释至单分子水平以载入微孔阵列芯片中的反应腔室进行滚环扩增,并利用分子信标与扩增产物结合释放荧光信号; 实时监测并获取所述荧光信号以生成时间分辨的荧光强度曲线; 提取所述荧光强度曲线的斜率参数以通过转换计算得到催化合成速率用于评估酶活性; 利用n重高斯混合模型拟合催化合成速率值分布以获得用于评估群体均一性的标准差和用于评估稳定性的变异系数; 其中,所述提取所述荧光强度曲线的斜率参数以通过转换计算得到催化合成速率用于评估酶活性具体包括: 采用图像增强技术抑制光学噪声后,基于预定义的孔位模板进行特征孔定位以确定微孔阵列芯片中的反应孔位; 获取各反应孔位的时序荧光强度数据,并提取相应荧光强度曲线的斜率参数; 根据校准公式μ=kα·β进行转换计算得到催化合成速率,所述催化合成速率用于评估酶活性,其中,μ为催化合成速率,k为斜率参数,α为背景荧光增益系数,β为信标结合效率校正因子; 所述利用n重高斯混合模型拟合催化合成速率值分布以获得用于评估群体均一性的标准差和用于评估稳定性的变异系数具体包括: 基于获得的催化合成速率生成统计直方图,并采用n重高斯函数拟合方法按照建模公式进行分布特征建模,所述建模公式为: ,其中,n为高斯重数,y为荧光值的导数,x为温度序列,并使用Python中scipy库的拟合功能得到使等式误差最小的参数; 根据获得的n重高斯混合模型通过计算1000个反应孔位的催化合成速率的标准差以评估群体均一性; 根据获得的n重高斯混合模型在900分钟内以1分钟为间隔计算催化合成速率期望值序列的变异系数以评估稳定性。
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