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龙图腾网获悉广州医科大学附属口腔医院(广州医科大学羊城医院)申请的专利一种氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法、注射式复合物及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120249196B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-27发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510449190.3，技术领域涉及：C12N5/0775；该发明授权一种氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法、注射式复合物及其应用是由黄文燕;杨晶晶;黄宇航;曾素娟;何雁冰;帕塔克·贾纳克·拉尔设计研发完成，并于2025-04-10向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法、注射式复合物及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了一种氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法、注射式复合物及其应用，该氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法包括以下步骤：a、细胞提取与培养；步骤b、筛选最优LiCl浓度用于诱导SHEDs成牙本质分化；c、采用琼脂糖微孔三维培养法构建SHEDs三维微球：步骤d、检测SHEDs三维微球的活性。该制备方法避免了外源生长因子的使用，且通过氯化锂诱导SHEDs向成牙本质细胞分化，并结合三维培养技术构建SHEDs三维微球，通过模拟体内微环境，显著提升成牙本质细胞的分化效率和再生能力。该注射式复合物由上述SHEDs三维微球与生物相容性水凝胶混合制备而成，其可应用于牙髓再生治疗。

本发明授权一种氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法、注射式复合物及其应用在权利要求书中公布了：1.一种氯化锂诱导的SHEDs三维微球的制备方法，其特征在于，包括有以下步骤，具体的： 步骤a、细胞提取与培养：从人脱落乳牙中提取SHEDs进行原代培养和传代扩增，选取P3-P6代细胞用于后续实验，SHEDs即为人脱落乳牙牙髓干细胞； 步骤b、筛选最优LiCl浓度用于诱导SHEDs成牙本质分化： 步骤b1、选用步骤a所获得的P3-P6代生长状态良好的SHEDs细胞，通过设置不同LiCl浓度的成骨诱导培养基来诱导SHEDs成牙本质分化； 步骤b2、对不同LiCl浓度的成骨诱导培养基诱导SHEDs成牙本质分化效果进行对比分析，以分析LiCl对SHEDs的增殖和成牙本质影响，并筛选出最优LiCl浓度，所筛选获得的最优LiCl浓度为2.5mmolL； 步骤c、采用琼脂糖微孔三维培养法构建SHEDs三维微球： 步骤c1、制备培养模型微孔盘：将高温高压消毒后的浓度3%琼脂糖溶液倒入聚二甲基硅氧烷微柱阳模中，待琼脂糖溶液自然冷却凝固后即得到低粘附琼脂糖培养模型；其中，聚二甲基硅氧烷微柱阳模含有直径为200µm、深度为150μm微柱，且相邻微柱之间的间距为200μm；而后使用与24孔板单孔同直径的圆柱形切割器将低粘附琼脂糖培养模型切割成圆柱形琼脂糖微孔盘，并将切割好的圆柱形琼脂糖微孔盘分别放入24孔板中，24孔板中每孔放入一个圆柱形琼脂糖微孔盘；再后往24孔板中的各琼脂糖微孔盘分别加入500μL的PBS缓冲液，且在紫外线消毒后备用； 步骤c2、构建SHEDs微球：在铺设好琼脂糖微孔盘的24孔板中每孔加入800μL的PM培养基，而后将步骤a所培养的SHEDs以5×105个孔的密度接种于琼脂糖微孔盘中，静置10分钟后，放入37℃恒温培养箱中进行恒温培养24小时；再后将琼脂糖微孔盘的培养基更换为含有由步骤b所筛选获得的最优LiCl浓度的成骨诱导培养基，在37℃恒温培养箱继续恒温培养，且每隔2天更换一次成骨诱导培养基，在此过程中，通过光学显微镜观察微球形成情况，在培养14天即获得SHEDs三维微球； 步骤d、通过活死染色方法和DAPIPhalloidin染色方法检测所获得的SHEDs三维微球的活性； 通过RT-PCR分析方法、WesternBlot免疫荧光分析方法或者茜素红染色分析方法分析对比二维培养的SHEDs、常规成骨诱导培养基诱导的SHEDs微球和含LiCl的成骨诱导培养基诱导的SHEDs微球三者间成牙本质分化效果。

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