湖南农业大学刘巧林获国家专利权
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龙图腾网获悉湖南农业大学申请的专利一种稀有鮈鲫gnaq敲除品系的构建方法及其应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN120758572B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202511005993.6,技术领域涉及:C12N15/89;该发明授权一种稀有鮈鲫gnaq敲除品系的构建方法及其应用是由刘巧林;胡时涛;胡旭东;张艺龄;沈瑶;刘佳;肖调义设计研发完成,并于2025-07-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种稀有鮈鲫gnaq敲除品系的构建方法及其应用在说明书摘要公布了:本发明属于生物技术领域,具体涉及一种稀有鮈鲫gnaq敲除品系的构建方法及其应用,本发明采用CRISPRCas9基因编辑技术,针对稀有鮈鲫gnaq基因设计双靶点sgRNA靶点1诱导‑8bp缺失,靶点2介导+32bp插入。通过ZiFiT靶点设计软件优化sgRNA序列,并经NCBIBLAST比对确保靶向特异性。将体外转录的sgRNA与Cas9mRNA共同显微注射至稀有鮈鲫受精卵,获得F0代嵌合体。经F1代杂合子自交后,在F2代中成功筛选到符合孟德尔遗传规律的纯合突变体gnaq‑8和gnaq+32。本发明首次在稀有鮈鲫中实现gnaq敲除,填补了稀有鮈鲫G蛋白信号通路研究的空白,为后续鱼类相关基因功能研究如抗病毒免疫、肿瘤机制提供重要模型。
本发明授权一种稀有鮈鲫gnaq敲除品系的构建方法及其应用在权利要求书中公布了:1.一种稀有鮈鲫gnaq敲除品系的构建方法,其特征在于,所述构建方法包括以下步骤: 1sgRNA靶位点设计; 2设计靶位点sgRNA合成所需sgDNA扩增引物gnaq-sgRNA-F1、gnaq-sgRNA-F2和gnaq-sgRNA-R,以及突变类型鉴定引物gnaq-identify-F和gnaq-identify-R; 3DNA提取; 4合成sgRNA; 5gnaq基因敲除,获得F0代; 6靶位点有效性检测; 7待F0代稀有鮈鲫发育成熟后,与野生型个体进行交配,获得F1代,对F1代经测序确认,获得的经测序确认的F1代个体; 8选取经测序确认的F1代个体,待其发育至性成熟后,通过基因型鉴定筛选出gnaq突变杂合子,选择突变类型相同的F1代雌雄个体进行人工繁殖,培育其子代即F2代; 所述靶位点如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示; 所述gnaq-sgRNA-F1、gnaq-sgRNA-F2、gnaq-sgRNA-R、gnaq-identify-F和gnaq-identify-R的序列如SEQIDNO:3-SEQIDNO:7所示; 所述gnaq基因敲除使用CRISPR-Cas9技术。
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