山东农业大学朱巧巧获国家专利权
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龙图腾网获悉山东农业大学申请的专利一种利用改良的叶盘转化法提高苹果CRISPR/Cas9系统编辑效率的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119586541B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-23发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411606957.0,技术领域涉及:A01H4/00;该发明授权一种利用改良的叶盘转化法提高苹果CRISPR/Cas9系统编辑效率的方法是由朱巧巧;由春香;王小非设计研发完成,并于2024-11-12向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种利用改良的叶盘转化法提高苹果CRISPR/Cas9系统编辑效率的方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种用改良的叶盘转化法提高苹果CRISPRCas9系统编辑效率的方法,属于生物技术领域。本发明根据木本植物组织培养养分需求,提供了一种培养基组合,可以满足苹果叶片再生的需求,诱导出分化能力强的愈伤组织和再生芽,克服了苹果遗传转化效率低的难题。基于该培养基套餐改良的叶盘转化法可以显著提高苹果CRISPRCas9系统编辑效率,能够高效递送CRISPRCas9敲除载体,获得包括缺失,替换,插入等不同突变类型的纯合体和杂合体植株,编辑效率高达92.3%。本发明提供的方法对于解析苹果遗传机制,改良农艺性状以及利用基因编辑技术进行种质创新提供了新思路。
本发明授权一种利用改良的叶盘转化法提高苹果CRISPR/Cas9系统编辑效率的方法在权利要求书中公布了:1.一种培养基组合,其特征在于,包括:侵染培养基、脱分化启动培养基、愈伤诱导培养基、芽分化培养基和芽增殖培养基;外植体为苹果组培苗叶片; 所述侵染培养基配置方法为:1.0-5.0gLWPM培养基+1-30gL蔗糖+1-20gL葡萄糖+0.5gL4-吗啉乙磺酸+0.1-1gL硫酸镁; 所述脱分化启动培养基配置方法为:1.0-5.0gLWPM培养基+1-30gL蔗糖+1-20gL葡萄糖+0.1-0.5gL水解酪蛋白+0.1-0.5gL水解乳清蛋白+0.1-2.0mgL2,4-二氯苯氧乙酸+0.1-2.0mgL氨氯吡啶酸+2.9gL植物凝胶+0.5gL4-吗啉乙磺酸+0.2-2gL聚乙烯吡咯烷酮,pH=5.8; 所述愈伤诱导培养基配置方法为:1.0-5.0gLWPM培养基+30gL蔗糖+00.1-0.5gL水解酪蛋白+0.1-0.5gL水解乳清蛋白+0.1-2.0mgL噻苯隆+0.1-2.0mgL6-苄氨基嘌呤+0.1-2.0mgL萘乙酸+2.9gL植物凝胶+0.5gL4-吗啉乙磺酸+320mgL特美汀+0.2-2gL聚乙烯吡咯烷酮,pH=5.8; 所述芽分化培养基配置方法为:1.0-5.0gL改良型MS培养基+0.1-0.5mgL硫酸铜+30gL蔗糖+0.1-2.0mgL噻苯隆+0.1-2.0mgL6-苄氨基嘌呤+0.1-2.0mgL吲哚丁酸+2.9gL植物凝胶+0.5gL4-吗啉乙磺酸+320mgL特美汀+0.2-2gL聚乙烯吡咯烷酮+3mgL潮霉素,pH=5.8; 所述芽增殖培养基配置方法为:1.0-5.0gLMS培养基+0.05-0.5mgL硫酸铜+30gL蔗糖+100mLL椰子粉+0.1-1.0mgL6-苄氨基嘌呤+0.1-1.0mgL吲哚丁酸+2.9gL植物凝胶+0.5gL4-吗啉乙磺酸+320mgL特美汀+3mgL潮霉素,pH=5.8; 所述改良型MS培养基中硝酸铵和硝酸钾含量分别为MS培养基中硝酸铵和硝酸钾含量的12。
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