浙江工业大学孙东昌获国家专利权
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龙图腾网获悉浙江工业大学申请的专利一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119842584B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510092402.7,技术领域涉及:C12N1/21;该发明授权一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法是由孙东昌;张楠;孙志永;宋增科;胡诗龙;焦玲玲设计研发完成,并于2025-01-21向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种以隐秘质粒为表达载体的高产β‑丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法,所述工程菌敲除底盘菌基因组中pckA基因、lacI基因、asnA基因、ygeA基因、gldA基因、nadB基因、dhaK基因中的一种或多种,和或过表达glpF基因、glpD基因、yddG基因、ydcZ基因、rocG基因、glnA基因中的一种或多种构建获得的;所述yddG基因、ydcZ基因、rocG基因采用高拷贝隐秘质粒pMUT1进行过表达。本发明以葡萄糖和甘油为碳源,将工程菌β‑丙氨酸产量提高至原产量的3倍左右的水平,减少了发酵过程诱导剂的添加成本,发酵生产过程安全无污染。
本发明授权一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌及双碳源发酵方法在权利要求书中公布了:1.一种以隐秘质粒为表达载体的高产β-丙氨酸的工程菌,其特征在于,所述工程菌以E.coliNissle1917ΔcycAΔfumB1ΔaspCΔpykpGLO-PJ23100-panDK43Y-aspBpSU19-PJ23100ppCaspA为底盘菌,按如下步骤构建工程菌ECN-20: 1敲除底盘菌基因组中pckA基因,即工程菌ECN-7; 2在工程菌ECN-7的基础上,敲除基因组的lacI基因即工程菌ECN-8; 3在工程菌ECN-8的基础上,采用质粒pSU19和启动子Ptac过表达glpF基因,即工程菌ECN-9; 4在工程菌ECN-9的基础上,敲除基因组中asnA基因,即工程菌ECN-10; 5在工程菌ECN-10的基础上,敲除基因组中ygeA基因,即工程菌ECN-11; 6在工程菌ECN-11的基础上,采用质粒pSU19和启动子Ptac过表达glpD基因,即工程菌ECN-12; 7在工程菌ECN-12的基础上,敲除基因组中gldA基因,即工程菌ECN-13; 8在工程菌ECN-13的基础上,敲除基因组中nadB基因,即工程菌ECN-14; 9在工程菌ECN-14的基础上,敲除基因组中dhaK基因,即工程菌ECN-15; 10在工程菌ECN-15的基础上,采用质粒pGLO和启动子PJ23100过表达ydcZ基因,即工程菌ECN-16; 11在工程菌ECN-16的基础上,采用质粒pGLO和启动子PJ23100过表达yddG基因,即工程菌ECN-17; 12在工程菌ECN-17的基础上,采用质粒pGLO和启动子PJ23100过表达rocG基因,即工程菌ECN-18; 13在工程菌ECN-18的基础上,采用质粒pSU19和启动子Ptac过表达glnA基因,即工程菌ECN-19; 14在工程菌ECN-19的基础上,消除基因组中pMUT1质粒,并使用pMUT1为载体替换pGLO质粒过表达panD、aspB、yddG、ydcZ、rocG基因即工程菌ECN-20; 所述yddG基因核苷酸序列如NCBI中NZ_CP007799.1的1667167-1668048所示,ydcZ基因核苷酸序列如NCBI中NZ_CP007799.1的1636228-1636677所示,rocG基因核苷酸序列如NCBI中CP147877.1的3882132-3883439所示;所述glpF基因核苷酸序列如NCBI中NZ_CP007799.1的4540078-4540923所示,glpD基因核苷酸序列如NCBI中NZ_CP007799.1的3918024-3919529所示、glnA基因核苷酸序列如NCBI中NZ_CP007799.1的4483254-4484663所示。
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