江苏科技大学唐盛获国家专利权
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龙图腾网获悉江苏科技大学申请的专利基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115950967B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-20发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202211211805.1,技术领域涉及:G01N30/02;该发明授权基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法是由唐盛;沈薇;刘畅;宋畅设计研发完成,并于2022-09-30向国家知识产权局提交的专利申请。
本基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法在说明书摘要公布了:本发明公开了基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法,所述方法借助DSN剪切过程,循环放大了来自生物胺的信号,并结合剪切的长短核酸探针实现了多种生物胺在HPLC上的信号分离,有效进行了目标信号源的置换工作,实现了在一次运行中对多种生物胺进行快速识别和检测。与现有技术相比,本发明具有以下优点:1所述方法可忽略的背景信号与累积信号放大将四种目标生物胺检测限分别降低至0.25pM、0.21pM、0.27pM和0.19pM,线性范围为1pM‑1μM。2所建立的方法应用在食品药品检测中,同时测定实际样品如硫酸大庆霉素、鱼肉和猪肉样品中的生物胺含量以证明其实用性。3本发明具有高通量、高灵敏度、高选择性,高检测效率等优点。
本发明授权基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法在权利要求书中公布了:1.基于核酸适配体置换结合检测多种生物胺的色谱分析法,其特征在于,包括步骤: S1、将被生物素标记的适配体Aptamer1、Aptamer2、Aptamer3和Aptamer4偶联至链霉亲和素涂层的磁珠表面,得到4种适配体-磁珠偶联物,适配体序列为SEQIDNO:1-4;将被生物素标记的探针Probe1、Probe2、Probe3和Probe4偶联至链霉亲和素涂层的磁珠表面,得到4种探针-磁珠偶联物,探针序列为SEQIDNO:5-8; S2、将4种适配体-磁珠偶联物加入离心管中,然后依次加入Trigger1、Trigger2、Trigger3、Trigger4,序列为SEQIDNO:9-12和反应缓冲液,37℃反应1小时后依次加入酪胺、组胺、精胺和色胺,37℃继续反应2小时;反应结束后置于磁力架上,取上清液加入到含有4种探针-磁珠偶联物的棕色离心管中,然后加入DSN和反应缓冲液,反应混合物混合均匀后40℃孵育,加入2×DSN终止反应,反应液置于磁力架上,取上清液注入HPLC中进行检测; S3、采用5%的乙腈和100mM的醋酸三乙胺溶液作为流动相A,甲醇作为流动相B,柱温设置为35℃,流速为1.0mLmin,在梯度洗脱模式下,20min内甲醇的比例由10%增加到20%,荧光检测器的激发波长和发射波长分别设置为488nm和520nm,对目标物进行荧光检测; 其中,HPLC采用全多孔杂化硅胶柱PhenomenexClarity®3μmOligo-RP色谱柱,内径为50×4.6mm、粒径为3μm,使用LCsolution软件进行数据处理。
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