北京华诺泰生物医药科技有限公司邢超获国家专利权
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龙图腾网获悉北京华诺泰生物医药科技有限公司申请的专利一种重组人偏肺病毒融合前F蛋白纯化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119176858B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411678452.5,技术领域涉及:C07K14/115;该发明授权一种重组人偏肺病毒融合前F蛋白纯化方法是由邢超;刘涛;秦耀斌;张强;赵策;刘晓满;付丽丽;杨立宪设计研发完成,并于2024-11-22向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种重组人偏肺病毒融合前F蛋白纯化方法在说明书摘要公布了:本发明属于蛋白纯化技术领域,具体涉及一种重组人偏肺病毒融合前F蛋白纯化方法,包括利用深层滤器过滤发酵液,得到发酵澄清液;采用羟基磷灰石从发酵澄清液中捕获重组hMPVF蛋白,得到纯化液1;采用低pH法对纯化液1进行病毒灭活,得到灭活液;对灭活液进行阴离子交换层析,得到纯化液2;对纯化液2进行复合弱阴离子层析,得到纯化液3;对纯化液3进行UFDF,得到超滤液;对超滤液进行除病毒纳滤和无菌过滤,得到重组hMPVF原液。所述方法简便,重复性好,适用于规模化生产,能有效地用于生产重组人偏肺病毒融合前F蛋白疫苗。
本发明授权一种重组人偏肺病毒融合前F蛋白纯化方法在权利要求书中公布了:1.一种重组人偏肺病毒融合前F蛋白纯化方法,其特征在于,所述方法包括: P1:利用深层滤器过滤发酵液,得到发酵澄清液; P2:采用羟基磷灰石层析从发酵澄清液中捕获重组hMPVF蛋白,得到纯化液1; P3:采用低pH法对纯化液1进行病毒灭活,得到灭活液; P4:对灭活液进行阴离子交换层析,得到纯化液2; P5:对纯化液2进行复合弱阴离子层析,得到纯化液3; P6:对纯化液3进行UFDF,得到超滤液; P7:对超滤液进行除病毒纳滤和无菌过滤,得到重组hMPVF蛋白原液; 所述的羟基磷灰石层析中羟基磷灰石填料是孔径为40、60或80μm的Ⅱ型羟基磷灰石;所述P2步骤具体包括用磷酸缓冲液平衡羟基磷灰石层析柱至基线平稳;将发酵澄清液电导率用纯化水稀释至小于8.0mScm进行上样;上样结束后,用0~70mMNaCl的磷酸缓冲液再次平衡层析柱至基线平稳;使用70~500mMNaCl的磷酸缓冲液洗脱,收集目的蛋白洗脱液,得到所述纯化液1; 所述P3步骤具体包括用≤4M的稀盐酸调节纯化液1的pH至≤3.8,18~26℃孵育30~60min,灭活完成后用碱液或Tris-HCl将pH调到6.5~7.0,得到所述灭活液;所述碱液为0.1~0.5MNaOH;Tris-HCl浓度为0.5~1.0M,pH为8.0~9.0; 所述的阴离子交换层析中阴离子交换填料为带有季铵基[-CH2-N+CH33]功能基团的阴离子交换填料; 所述的阴离子交换层析具体包括以下步骤:用磷酸缓冲液平衡阴离子交换层析柱至基线平稳;将灭活液调节电导率不高于9.0mScm进行上样;上样结束后,用磷酸缓冲液再次平衡层析柱至基线平稳;使用含0~300mMNaCl的磷酸缓冲液线性洗脱,收集目的蛋白洗脱液,得到所述纯化液2; 所述的复合弱阴离子层析具体包括以下步骤:用磷酸缓冲液平衡层析柱至基线平稳;将纯化液P2上样至复合弱阴离子层析柱;上样结束后,用含100~200mMNaCl的磷酸缓冲液再次平衡层析柱至基线平稳;使用含0.5~1.0MNaCl的磷酸缓冲液脱,收集目的蛋白洗脱液,得到所述纯化液3。
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