塔里木大学王江波获国家专利权
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龙图腾网获悉塔里木大学申请的专利一种利用花药诱导愈伤组织为受体的枣遗传转化方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119162239B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-09发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411343971.6,技术领域涉及:C12N15/84;该发明授权一种利用花药诱导愈伤组织为受体的枣遗传转化方法是由王江波;童盼盼;冯一峰;郭俊娇设计研发完成,并于2024-09-25向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种利用花药诱导愈伤组织为受体的枣遗传转化方法在说明书摘要公布了:本发明公开了一种利用花药诱导愈伤组织为受体的枣遗传转化方法,包括以下步骤:对无菌花药进行培养得到愈伤组织;构建含有目的基因的植物重组过表达载体并转入农杆菌,获得农杆菌浸染液;用农杆菌浸染液浸染愈伤组织,再将浸染后的愈伤组织置于黑暗条件下共培养;然后将愈伤置于含潮霉素的培养基上进行筛选,筛选培养20‑30d即可得到纯合的抗性愈伤。本发明首次利用京39枣花药诱导的愈伤组织为受体,建立了京39枣遗传转化体系的方法,该方法转化频率高,同时可借助35S::EGFP荧光报告基因标记辅助筛选,方便快捷。本发明方法为枣基因功能解析和枣的遗传改良提供了便利。
本发明授权一种利用花药诱导愈伤组织为受体的枣遗传转化方法在权利要求书中公布了:1.一种利用花药诱导愈伤组织为受体的枣遗传转化方法,其特征在于,所述枣为京39枣,其遗传转化方法包括以下步骤: i对无菌花药进行培养得到愈伤组织; ii构建含有目的基因的植物重组过表达载体并转入农杆菌,获得农杆菌浸染液; iii用农杆菌浸染液浸染愈伤组织,再将浸染后的愈伤组织置于黑暗条件下培养; iv将iii愈伤置于筛选培养基培养,得到纯合的抗性愈伤; 步骤i所述培养的方式为:将无菌花药接种至诱导培养基上,26℃暗培养30d,再将诱导成功的愈伤组织转移至增殖培养基上培养,且光照周期为168h,培养温度为26℃;其中,所述诱导培养基为4.43gL12MS+1.0mgL2,4-二氯苯氧乙酸+0.5mgL噻苯隆+30gL蔗糖+6.0gL琼脂;所述增殖培养基为4.43gLMS+1.0mgL2,4-二氯苯氧乙酸+0.5mgL噻苯隆+30gL蔗糖+8.0gL琼脂; 所述植物重组过表达载体为含有目的基因的pH7WG2D质粒,且所述pH7WG2D质粒携带有35S启动子、EGFP标签、壮观霉素和潮霉素抗性基因; 步骤iii所述培养的方式为:将沥干农杆菌浸染液的愈伤组织置于固体MS共培养基上,于黑暗条件下共培养2-3天;其中,所述固体MS共培养基为4.43gLMS+1.0mgL2,4-二氯苯氧乙酸+0.5mgL噻苯隆+30gL蔗糖+8gL琼脂+100mM乙酰丁香酮; 步骤iv所述筛选培养基培养的方法为:用含有潮霉素的筛选培养基进行培养;所述筛选共培养基为4.43gLMS+1.0mgL2,4-二氯苯氧乙酸+0.5mgL噻苯隆+30gL蔗糖+8gL琼脂+50mgL潮霉素。
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