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龙图腾网获悉中国人民解放军军事科学院军事医学研究院申请的专利一种CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120555510B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202511071729.2，技术领域涉及：C12N15/85；该发明授权一种CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系及其应用是由李岩;袁一铭;张文盛;孟腾;赵越;邱业峰设计研发完成，并于2025-08-01向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系及其应用在说明书摘要公布了：本发明涉及变异或遗传工程领域的一种CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系及其应用。本发明的CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系的构建包括如下步骤：步骤一、构建含有FGF5基因靶标序列的Cas9的定点敲除质粒；步骤二、构建含有FGF5基因同源臂的同源修复质粒Donor‑2kbHA‑SV40LT；步骤三、构建含有SV40LT蛋白表达框的供体DNA；步骤四、定点稳定表达SV40LT蛋白的绵羊胎儿成纤维细胞系的制备。本发明创制的永生化SFF‑FGF5SV40LT单克隆细胞株可成为绵羊CRISPR文库筛选、多重基因编辑、突变基因功能探究等基因组编辑研究理想的工具细胞系。

本发明授权一种CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系及其应用在权利要求书中公布了：1.一种CRISPR介导的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系的构建的方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤一、构建含有FGF5基因靶标序列的Cas9的定点敲除质粒； 所述定点敲除质粒的构建方法为： 步骤1、将单链DNA退火形成双链DNA；分别对如SEQIDNo:2和SEQIDNo:3所示的DNA引物进行溶解，接着，混合并放入PCR仪中进行退火，获得退火Mix； 步骤2、用BbsI单酶切pX330质粒； 步骤3、将退火Mix和步骤2的酶切产物用T4DNA连接酶进行连接反应，获得步骤一所述定点敲除质粒； 步骤二、构建含有FGF5基因同源臂的同源修复质粒Donor-2kbHA-SV40LT： 将所述FGF5基因的基因组上游序列设为左同源臂，所述FGF5基因组下游序列设为右同源臂；所述同源修复质粒Donor-2kbHA-SV40LT为通过无缝克隆技术将所述左同源臂、CMV-SV40LT-pA表达结构、所述右同源臂、pX330质粒这4个DNA片段相连构建得到； 所述CMV-SV40LT-pA表达结构的核苷酸序列为SEQIDNo:4的第4747-7743位； 所述同源修复质粒Donor-2kbHA-SV40LT的序列如SEQIDNo:4所示； 步骤三、构建含有SV40LT蛋白表达框的供体DNA： 将步骤二获得的同源修复质粒Donor-2kbHA-SV40LT用引物进行PCR扩增，从而获得左右同源臂为2kb的永生化基因SV40LT表达框供体DNA； 步骤四、定点稳定表达SV40LT蛋白的绵羊胎儿成纤维细胞系的制备： 将步骤三获得的供体DNA与步骤一所述的定点敲除质粒共同转染至绵羊胎儿成纤维细胞，获得可稳定表达SV40LT蛋白的永生化绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系。

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