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龙图腾网获悉粤港澳大湾区精准医学研究院(广州)申请的专利一种引物与探针的设计方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN120544659B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-06发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510602427.7，技术领域涉及：G16B5/00；该发明授权一种引物与探针的设计方法是由冯晓敏;金健;许伟宏设计研发完成，并于2025-05-12向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种引物与探针的设计方法在说明书摘要公布了：本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种引物与探针的设计方法。本技术方案前置PTCD预测并由此筛选出候选扩增子区，有效避免了二级结构对引物结合的阻碍，提高扩增效率和灵敏度。同时，引入一系列PTCD与引物探针互作性的参数阈值，弥补了引物探针设计的缺失环节，设计在不同模板背景下的普适性和特异性。该方法适用于检测不同种属的基因表达、基因突变。此外，流程设计的标准化使其能够与CRISPR技术、单细胞测序、NGS等新技术结合，具有广阔的技术拓展空间。本技术方案通过优化引物和探针设计，规避了靶标核酸的二级结构，围绕PTCD，突破了引物探针设计的瓶颈，显著提高了多重qPCR和dPCR的扩增效率和检测灵敏度，具有重要的技术创新性和应用价值。

本发明授权一种引物与探针的设计方法在权利要求书中公布了：1.一种基于PCR模板动态构象PTCD设计多重qPCR和dPCR引物及探针的方法，所述方法包括如下步骤： S1.筛选扩增子区域：输入靶标核酸序列信息，利用模型，模拟所述序列在PCR试验退火温度下PTCD信息； S2.识别并筛选候选扩增子区域，所述候选扩增子区域序列满足以下条件： S2.1在候选区域5'端及3'端各延伸200bp的侧翼区域内，单链非线性构象的数量≤3；所述单链非线性构象包括发夹结构、茎环结构及G-四链体； S2.2候选区域的CG含量≤55%； S3.基于PTCD与引物探针的互作关系，设计满足S3.1、S3.2、S3.3和或S3.4条件的引物探针组合： S3.1引物3'端末尾的5个碱基与候选区域内任何PTCD构象的互补匹配长度＜3bp； S3.2探针全序列与候选区域内任何PTCD构象的互补匹配自由能＞-5kcalmol，即探针全序列不存在与扩增子内任何PTCD的互补情况； S3.3引物3'端最后3个碱基不包含连续同源二核苷酸AA或TT； S3.4引物5'端初始的5个碱基与候选区域内任何PTCD构象的互补匹配长度＜3bp； S4.结合常规引物探针参数完成最终设计，所述参数包括长度、Tm值、GC%和二聚体形成情况； S5.利用insilicoPCR工具，验证PCR特异性。

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