合肥工业大学刘健获国家专利权
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龙图腾网获悉合肥工业大学申请的专利一种荧光示踪小鼠的构建及其在Mcpt4阳性与阴性肥大细胞分选中的应用获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119824037B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-01-06发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202510034288.2,技术领域涉及:C12N15/85;该发明授权一种荧光示踪小鼠的构建及其在Mcpt4阳性与阴性肥大细胞分选中的应用是由刘健;张志鑫;王佳晖;张弦设计研发完成,并于2025-01-09向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种荧光示踪小鼠的构建及其在Mcpt4阳性与阴性肥大细胞分选中的应用在说明书摘要公布了:本发明提供了一种荧光示踪小鼠的构建方法及其在Mcpt4阳性与阴性肥大细胞分选中的应用。本发明首先利用CRISPRCas9技术将Cre基因敲入C57BL6小鼠的Mcpt4基因序列中,再通过动物杂交和Cre‑loxP重组技术,获得Mcpt4阳性肥大细胞的荧光示踪小鼠模型。荧光示踪小鼠模型具有红色荧光蛋白tdTomato与绿色荧光蛋白ZsGreen双荧光报告基因系统,Mcpt4阳性肥大细胞显示红色荧光,其它Mcpt4阴性细胞显示绿色荧光。利用该荧光示踪小鼠模型可以快速、精准、有效地分选Mcpt4阳性与阴性肥大细胞,为探究Mcpt4阳性与阴性肥大细胞在免疫反应中的作用及机制提供可靠的技术基础。
本发明授权一种荧光示踪小鼠的构建及其在Mcpt4阳性与阴性肥大细胞分选中的应用在权利要求书中公布了:1.一种荧光示踪小鼠的构建方法,其特征在于包括以下步骤: 1使用来自C57BL6库的细菌人工染色体克隆RP24-167M24和RP24-175A23作为模板,通过PCR生成同源臂,并将“2A-Cre”作为同源重组修复模板; 2设计靶向C57BL6小鼠14号染色体上Mcpt4基因序列的gRNA; 3将同源重组修复模板、gRNA、Cas9与靶向载体一起共同注射到受精卵中,移植至假孕小鼠子宫内,繁育出的小鼠通过基因鉴定,获得基因型为Mcpt4-cre小鼠; 4将Mcpt4-cre小鼠与携带GR-loxP重组基因的同源小鼠杂交,获得基因型为Mcpt4-cre;GR的荧光示踪小鼠; 5基因型为Mcpt4-cre;GR的荧光示踪小鼠中Mcpt4阳性细胞遗传性表达tdTomato红色荧光蛋白,Mcpt4阴性细胞遗传性表达ZsGreen绿色荧光蛋白,利用红色荧光蛋白tdTomato与绿色荧光蛋白ZsGreen双荧光报告系统,可以对特异性表达Mcpt4的细胞进行红色荧光示踪。
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